反相高效液相色谱法制备喜树细胞内生物碱单体.pdf

第33 卷 分析化学 （FENXI HUAXUE ） 研究简报 第4 期 2005 年4 月 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 501 ~ 504 反相高效液相色谱法制备喜树细胞内生物碱单体 ＊ 于 放 张冬艳 关 水 白凤武 安利佳 （大连理工大学生物科学与工程系，大连 116023 ） 摘 要 利用制备高效液相色谱法从喜树细胞中分离制备了在原植株内不存在的两种全新的生物碱单体-喜 树异碱A 和喜树异碱B 。在C18 柱上，以乙腈-水（体积比为35 165 ）为流动相，流速为5 mL/ min ，采用等度洗脱 方式，制备了这两种化合物。经紫外光谱、红外光谱及质谱分析，对这两种化合物进行了确认。高效液相色谱 分析表明，制备的喜树异碱A 和喜树异碱B 的纯度均在97% （质量分数）以上。在该色谱条件下，各色谱峰 达到了基线分离，且分离时间短，溶剂用量少。 关键词 喜树，生物碱，高效液相色谱法 ! 引 言 喜树（Camp totheca acuminate Decne. ）是珙桐科（Nyssaces ）乔木，又名水漠子、水桐树、天梓树、千张 树、南京梧桐、旱莲木，为我国南方特有植物。1966 年，美国的WaII 博士从喜树茎的提取物中分离得到 ［1］ ［2 ］ 了抗癌活性物质，将其命名为喜树碱（camptothecin ，CPT ） 。1985 年，Hisang 等 发现喜树碱作为一 种拓扑异构酶 （Topo ）的抑制剂具有抗癌活性，因而为喜树碱的进一步临床应用提供了实验基础。 ! ! 有关喜树碱及衍生物抑制Topo 的机理具有研究价值，尤其是它同Topo -DNA 复合物之间键合 ! ! 的本质并不十分清楚。而且目前对抗癌剂的活性因素评判不一，这就有必要发现和合成更多的喜树碱 类化合物，对抗癌的机制进行更深入的研究。 利用植物细胞培养技术生产次生代谢物质在很多药用植物上都取得了成功［3 ］。植物细胞培养技 术与常规的植株栽培相比具有许多特有的优势。其中之一就是通过细胞培养的方法，有可能产生在原 植株中不存在的全新化合物［4 ］。而高效液相色谱技术在对这些化合物的分离和制备过程中得到了广 ［5 ，6 ］ ［7 ，8 ］ 泛的应用 。喜树碱及其衍生物的测定方法及光谱学特性已有较多的研究报道 ，但针对喜树细胞 培养物的相关研究并不多见。在对喜树细胞培养体系的研究中，发现不含有喜树碱的细胞株的乙醇提 ［9 ］ 取物具有很强的抗癌活性 。通过反相高效液相色谱对提取物的分离和纯化以及光谱学的结构鉴定， 确定了活性物质单体的结构，为原植株不存在的生物碱———喜树异碱A 和喜树异碱B［10 ］。本实验利用 高效液相色谱从悬浮培养的喜树细胞中分离并制备了喜树异碱A 和喜树异碱B 单体，为进一步深入研 究喜树碱类药物的抗癌机制奠定了基础。同时通过紫外光谱、红外光谱及质谱分析对所制备的单体进 行了确认。 # 材料与方法 # . ! 仪器、试剂与材料 离子阱质谱（美国Finnigan 公司）；RE-52A 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；Waters 高效液相 色谱系统（美国Waters 公司）。分析柱：C18 ，5 m ，250 mm X 4 . 6 mm （中国科学院大连化学物理研究所 C ，5 m ，250 mm X 10 mm