人滋养层细胞培养上清液及裂解液中丙型肝炎病毒的检测.pdf

1296 人滋养层细胞培养上清液及裂解液中 丙型肝炎病毒的检测 高禄化，聂青和 (第四军医大学唐都医院传染病科，西安710038) 摘要：目的应用改良的分离、纯化方法对孕早期人绒毛滋养细胞进行原代培养。利用HCV阳性血清对滋养细胞进行体外感 染，探讨HCV在体外培养条件下对细胞的感染及HCV在细胞中的复制状态。方法采用胰蛋白酶消化法消化正常人妊娠孕早期 量的血清进行体外感染，应用免疫荧光染色检测滋养层细胞中HCVNS5表达，通过细胞裂解液裂解感染后细胞。应用荧光定量PCR (RT—PCR)技术检测感染后细胞培养上清和细胞内的HCVRNA．以观察HCV的感染及复制情况。结果该法分离纯化的滋养层 细胞生长良好，特异性角蛋白一7阳性，纯度高。原代滋养层细胞在与HCV阳性血清共同孵育后均未出现明显的细胞病变，感染后 48 h在滋养层细胞细胞浆中可见HCVNS5表达。感染后分别于24、48、72、96、120h收集的培养上清和感染后细胞内均可以检测到 HCV 层细胞的体外培养系统，HCV阳性血清能在体外感染原代培养的人滋养层细胞，HCV可在滋养层细胞中复制。 关键词：肝炎病毒属；滋养层 中图分类号：1t512．6+3文献标识码：A 文章编号：1001—5256(2011)12—1296一05 Detectionof Cvirusinthe ofhuman cellsandcell hepatitis supernatantplacentatrophoblastic lysates GAO theFourth Medical Lu—hua，NIE ofInfectious of Mgitary Qi帽一he．(DepartmentDiseases，死啦‘Hospital 7j0038．China) To HCVinfectionand inthe culturedhuman ceilswhichwerecultured Abstract：Objectiveinvestigate replicationprimarily trophoblagtic and methodsandCO—culturedwithHCVinfection8emm．MethodsHuman with byimprovedseparationpurification the andthen with inordertoobtain wereincubatedinHCV trypsin—DNagecentrifugedpercoll gradient trophoblasticceHs，which density ofHCVRNAwas5．9×10 ofHCVnon—structure positive8erllm(thequantification 5(HCV—NS5) 7copies／m1)．Theexpression protein Wagevaluatedimmunofluorescence．弧einfectedcellswere RNAinHCVinfected celh RT— by lysed．HCV trophoblagtWa$quantitatedby PC