几种分枝杆菌Middlebrook 7H9早期培养滤液蛋白质多肽谱初步分析.pdf

塞厦医堂盘查!Q螋堡笙箜鲞箜!!塑 3753 几种分枝杆菌Middlebr00k7H9早期培养 滤液蛋白质／多肽谱初步分析 李昕洁 刘志辉马志明 谭守勇 摘要 目的：初步了解分枝杆茵Middlebrook7H9早期培养滤液中蛋白质／多肽的存在状况，为进一步探讨 其致病性、药物作用靶点、诊断标志物等问题打下基础。方法：利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术对结 核分枝杆茵(ATcC27294)、胞内分枝杆菌(ATCC13950)、堪萨斯分枝杆菌(ATCC12478)、龟分枝杆菌(ATCC 19977)、瘰疬分枝杆菌(ATCC19981)、浅黄分枝杆菌(ATCC43909)、不产色分枝杆茵(ATCC19530)、海分枝杆菌 (A’rcC 927)、耻垢分枝杆菌(ATcC19420)和戈登分枝杆茵(ATCC14470)等10种分枝杆菌Middlebmok7H9的第 7天培养滤液进行蛋白质多肽谱分析。结果：与Middlebmok7H9培养液蛋白质多肽谱相比．其7d早期培养滤液分 杆菌相比有47种独特的早期培养滤液蛋白质多肽。结论：每种分枝杆茵有其独特的早期培养滤液蛋白质多肽谱． 其中某些蛋白质多肽可能与细菌的致病性相关。 关键词分枝杆茵属；表面增强激光解析电离飞行时间质谱； 蛋白质组； 细菌培养 蛋白质作为生命活动的体现者，始终是研究任何 检测实验，1支一80℃冻存备用。滤液即为不含培养细 生物体的重要课题。细菌分泌系统研究的重要进展表 菌的早期培养滤液。 明：大部分致病菌可通过其特定的分泌系统将致病因 1．4．3 WCX磁珠处理早期培养滤液(1)4℃冰箱取 子等蛋白质分子定位到细胞表面或分泌到细胞外执 出弱阳离子磁珠悬浮液一管．上下摇动混匀磁珠。(2) 行其独自的功能…。分枝杆菌作为条件致病菌，为研 究其致病性，笔者对其液体培养的早期滤液蛋白进行 中，再加人10斗L磁珠至样品管混匀。(3)向样品管中 了研究，现报告如下。 加入5斗L待检血清，混匀并室温静置5min。(4)将样 l材料与方法 品管放入磁珠分离器，使磁珠贴壁1min．磁珠与悬浮 1．1 实验菌株结核分枝杆菌(ATCC27294)、胞内液体分离。(5)吸走悬浮液体并加入100“L磁珠清洗 分枝杆菌(ATCC13950)、堪萨斯分枝杆菌(ATCC 缓冲液(ws)。在磁珠分离器前后相邻两孔间反复移 12478)、龟分枝杆菌(ATCC19977)、瘰疬分枝杆菌动样品管10次。静置使磁珠贴壁1min．磁珠与悬浮 (ATCC19981)、浅黄分枝杆菌(ATCC43909)、不产色液体分离。重复此步骤2次。(6)吸走悬浮液体并加入 分枝杆菌(ATcC19530)、海分枝杆菌(ATcC927)、耻 5肛L磁珠洗脱缓冲液(ES)，溶解贴壁磁珠。反复吹打 垢分枝杆菌(ATCC19420)和戈登分枝杆菌(ATCC10次。(7)将样品管放入磁珠分离器，磁珠贴壁2min， 14470)等10种分枝杆菌标准株，由北京市结核病胸磁珠与悬浮的液体充分分离后，将上清液移入干净的 部肿瘤研究所提供。 0．5mL样品管中。(8)向0．5mL样品管中加入5斗L 1．2 Middlebmok7H9培养基 其干粉、0ADc添加磁珠稳定缓冲液(SS)混匀，再加入磁珠稳定液的洗脱 剂购白美国BD公司，用前按产品说明书即时配制。 液混匀得质谱分析样品。 1．3 主要试剂和仪器 弱阳离子液体蛋白质芯片 1．4．4质谱分析(1)分析准备：包括标准品准备、基 (WCX磁珠)购自北京毅新兴业科技有限公司． micronexlM质谱仪由德国B11Jker Daltonics公司生产。具体操作程序参见参考文献[2]。