压电免疫生物传感器快速检测三唑磷农药.pdf

第38卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第10期 Chinese of 1483—1486 2010年lO月 JournalAnalyticalChemistry DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01483 压电免疫生物传感器快速检测三唑磷农药 黄君冉 盖玲 叶尊忠 王剑平’ (浙江大学生物系统工程与食品科学学院，杭州310029) 摘要采用活化剂碳二亚胺(EDC)和|7、r．羟基琥珀酰亚胺(NHS)对邻巯基苯甲酸(MBA)自组装修饰的石 英晶体金电极表面进行活化，再将三唑磷单克隆抗体共价固定于电极表面，建立了一种用于快速检测农药残 留的压电免疫生物传感器。采用浸入-干燥法和流动注射法检测目标农药并对实验过程进行分析。两种方法 均可在40一60 min内直接检测目标农药，浸入一干燥法的检出限为0．04ms／L，流动注射法的检出限为 1．0mg／L。使用8moL／L尿素成功解离了抗体．抗原免疫复合物，实现了免疫传感器的再生。此传感器的选 择性好，可以重复使用。 关键词压电免疫传感器；流动注射；三唑磷；自组装 1 引 言 蔬菜、茶叶、水果等农产品中农药残留问题引起全社会的广泛关注…。快速测定技术是监控农药 残留的有效手段，基于生物传感器的农药残留检测技术具有选择性好、速度快、灵敏度高等优点，是当前 农药残留快速检测研究热点，可实现农产品现场快速检测¨J。 传统的免疫测定法，如酶联免疫测定法(ELASA)，可快速检测农药残留，但传统方法不能对整个免 疫过程的动态变化进行实时监测【3’4J。压电免疫传感器因具有制备简单、灵敏度高、价格低廉、操作方 便以及能够在线监测免疫反应过程等优点【5】，已在生物检测中逐步得到应用【6．7】。本研究以果蔬中常 用的三唑磷为检测对象，研究了石英晶体金电极表面的自组装修饰过程，通过活化剂碳二亚胺(EDC) 和Ⅳ-羟基琥珀酰亚胺(NHS)对邻巯基苯甲酸(MBA)单分子层末端羧酸进行活化，将三唑磷单克隆抗体 固定于金电极表面哺1，制成生物敏感电极，从而构建了可直接快速检测三唑磷农药的压电免疫传感器。 使用浸入-干燥法和流动注射法检测目标农药，并对实验过程进行分析，这两种方法均具有简单、方便， 而且无需标记的特点。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 MHz石英晶体金电极(上海辰华仪器有限公司)；10通道注射 CrystalManufacturing公司)；AT切割的8 泵(美国Cole—Panner公司)；Milli—Q超纯水机(美国Millipore公司)。 三唑磷农药及其单克隆抗体(浙江大学农药与环境毒理研究所)；2一巯基苯甲酸(MBA，国药集团 化学试剂有限公司)；乙基一(3．二甲基氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC，上海源聚生物科技有限公司)； Ⅳ．羟基琥珀酰亚胺(NHS，国药集团化学试剂有限公司)；牛血清白蛋白(BSA，华美生物工程公司)；其 MQ·cm)制备。 它试剂均为分析纯。实验用水由MiUipore．MiUi—Q超纯水机(18．2 2．2实验方法 mol／L mol／L NaOH浸泡20min，0．1 HCl浸泡5 2．2．1电极清洗石英晶体金电极依次用0．1 min， Pirannha溶液(30％H202-98％H2S04，l：3，V／V)滴加到金电极两面lmin，每面滴加10弘L。每步实 2010-02—1 1收稿；2010-05-25接受 本文系浙江省科技计划重点国际合作项目(No．2006C24014)资助 ·E—mail：jpwang@zju．edu．cn 万方数据 1484