对根结线虫高毒力芽胞杆菌的鉴定及其活性测定.pdf

， 娶 Online 采叠生懈擎■ system：http：／／wvtw．jabiotech．org 农业生物技术学报 豳历r of Journal AgriculturalBiotechnology l■-—I一 2012，20(6)：669--675 DOI：10 1 3969／j．issn．1674-7968．2012．06．01 研究报告 Letter 对根结线虫高毒力芽胞杆菌的鉴定及其活性测定 余子全罗辉熊静尹佳胡胜标丁学知夏立秋‘ 湖南师范大学生命科学院，微隹物分子生物学省部共建国家重点实验室培育基地，长沙410081 +通讯作者·xiaN@htmu．edu．ca 摘要为筛选高效安全的杀虫资源，从海底淤泥中分离到一株对根结线虫溉20i幽舯船spp．)高毒力的 芽胞杆菌YBf-IO，PCR扩增16SrRAN基因，经测序、序列比对分析和系统进化树构建，发现其与坚强芽 rDNA同源性为99％，初步确定所分离的菌株为坚强芽胞杆菌。将 胞杆菌(Bacillwfimus)Z1．7菌株16S 该菌株培养至芽胞成熟，离心取上清，lO倍稀释后进行生物测定，发现其对北方根结线虫二龄幼虫有很 高的毒力。处理24h校正死亡率达到50％以上，72h达到100％。对根结线虫虫卵进行毒力测定表明，作 用48 h后能显著抑制虫卵孵化达到80％以上。在培养过程中分不同时段取样，并用所取样品上清进行生 物测定，发现从稳定期开始表现出了对北方根结线虫的毒力，在整个稳定期毒力持续增强。直到衰亡期后 期，毒力达到最高，表明坚强芽胞杆菌所产生的杀线虫活性物质主要是在稳定期合成的。将发酵上清 80℃处理30rain毒力无明显变化，通过饱和硫酸铵沉淀上清中蛋白，该蛋白对线虫无明显毒力，但是去 蛋白后的上清对线虫仍然具有与未经处理上清相似的杀线虫活性，表明坚强芽胞杆菌产生的杀线虫活性 物质是一种非蛋白类的小分子化合物。研究结果提示，本研究所分离的坚强芽胞杆菌在稳定期能够大量 合成对线虫具有毒杀活性的小分子化合物，对根结线虫表现出极高毒力，为利用该菌株开发植物寄生线 虫生防制剂提供了杀虫资源。 关键词坚强芽胞杆菌，根结线虫，毒力 on Nematodeof IdentificationandNematicidal Root-knot ActivityAssay a Strain Bacillus YU LUOHuiXIONGY1NJiaHU DINGXue-ZhiXIA Zi—Quan Jing Sheng-Biao Li-Qiu Base HunanProvincial ofMicrobial ofMicrobialMolecular K*yLaboratory Molecul日Biology／StateKeylaboratoryBreeding Biology,College ofLifeScience，HunanNormalUniversity,Changsha410081，China +唧ndiaga埘：h啊．xialq@humu．edu．cn For of