蛋白激酶Cδ对高葡萄糖刺激的HK-2细胞p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响.pdf

3542 ．基础研究． 蛋白激酶C8对高葡萄糖刺激的HK一2细胞 p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响 宋盼爱 肖力 杨玉艳 阳石坤 刘伏友孙林 【摘要】 目的 观察高葡萄糖作用下蛋白激酶C(PKC)8对人肾小管上皮细胞株(HK一2) p66Shc转录后蛋白磷酸化及线粒体转位的影响。方法以HK一2细胞作为体外观察的细胞，采用不 同浓度的D一葡萄糖进行刺激，分别用实时定量PCR(RT—PCR)和Western印迹法检测PKC8和p66Shc 基因表达及蛋白磷酸化水平；然后将HK一2细胞分为3组：5mmol／L低葡萄糖组、30 mmol／L高葡萄糖 组、30mmol／L高葡萄糖+粗糠紫苦素(Rottlerin)1．0 Ixmol／L组。采用Western印迹法和细胞免疫荧 光方法检测p66Shc蛋白磷酸化水平及其线粒体转位情况。结果高葡萄糖处理HK．2细胞后，PKC8 和p66Shc mRNA及蛋白磷酸化水平明显高于对照组[其中PKC8mRNA及其磷酸化蛋白的表达量随 着D一葡萄糖浓度(15、30、45mmol／L)的增加分别上调0．9、1．3和1．6倍及0．4、1．5和2．0倍，均P 0．05]，且呈剂量和时间依赖；高糖+Rottlerin组p66Shc蛋白磷酸化水平及其线粒体转位明显低于对 照组，(高糖+Rottlerin组在180 min时线粒体p66Shc磷酸化蛋白表达量下调3．1倍，P0．01)。 结论高葡萄糖可诱导HK一2细胞PKC8和p66Shc的转录及磷酸化，PKC8可促进高葡萄糖诱导的 066Shc磷酸化及其线粒体转位。 【关键词】糖尿病肾病；葡萄糖；蛋白激酶C8；p66Shc；线粒体转位 RoleofPKC8onthe andmitochondriaItranslocationof inHK．2cells phosphorylation p66Shc induced SONG byhighglucose Pan—ai，XIAOLi．YANG Yu—ynn。YANGShi—kun．LfUFu—you， SUN￡流Institute South 41001 of 1， Nephrolog)‘，SecondXiangyaHospital，CentralUniversit3，Changsha China l@|63．corn Correspondingauthor：SUNLin．Email：sunlinnwul ToobservetheeffectofPKC8onthe of andits 【Abstract】Objective phosphorylationp66Shc mitochondrialtranslocationinhuman tubular cells(HK．2)under proximal highglucose(HG)．Methods cells HK一2 wereincubatedwithdifferentconcentrationsof mm01／L)forindicatedtime D—glucose(5—45 f 0—48h)．ThenthemRNA ofPKC8and andth