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中国农业科技导报，2009，11(4)：71—76 of Scienceand Journal Agricultural Technology 来源于假单胞菌4一硝基酚降解基因簇中的偏苯三酚 1，2一双加氧酶基因克隆和功能鉴定 孙 雯， 许 丽， 张双宇， 田 健， 初晓宇， 伍宁丰 (中国农业科学院生物技术研究所，北京100081) 摘要：通过富集培养的方法从农药厂废水曝气池的活性污泥中筛选到了一株既具有甲基对硫磷降解活性 又可以有效降解4一硝基酚的高效菌株1．7，经16S 酚降解相关基因保守区设计简并引物扩增小片段，再应用TAIL-PCR克隆得到偏苯三酚1，2一双加氧酶基因 diol，基因全长873 kDa。doil基因在EcoliBL21中过量表 bp，编码290个氨基酸，酶蛋白理论分子量为32．8 达，并通过Ni-NTA亲和层析纯化，结果表明该酶具有正常的生物学活性，证明了假单胞菌1-7可以通过偏苯 三酚途径降解4一硝基酚。初步探讨了假单胞菌l-7的4一硝基酚降解机制。 关键词：甲基对硫磷；4一硝基酚；假单胞菌；TAIL-PCR；偏苯三酚1，2一双加氧酶 中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：1008-0864(2009)04-0071-06 andCharacterizationof Cloning Hydroxyquinol1，2-dioxygenase fromPseudomonasNovelMemberof sp．：A 4-Nitrophenoi GeneCluster Degradation SUN Wen，XULi，ZHANG Jian，CHUXiao—yu，WU Shuang—yu，TIAN Ning—feng Research of (BiotechnologyInstitute，ChineseAgriculturalSciences，Beijing100081，China) Academy bacterimnl-7withthe of both and Abstract：A capability degradingmethylparathion from Pseudomonas16SrDNA，wasisolatedenrichmentmethod activated sp．by by OP·polluted sludge．The were totheconservativedomainsof degenerateprimersdesignedaccording to锄p崎 hydroxyquinoll，2-dioxygenase the diolWaSobtainedTAIL-PCRsubge- partialhydroxyquinoil．2-dioxygenagegene．Thecompletee