人乳头瘤病毒假病毒制备方法的优化.pdf

第48卷第2期 厦门大学学报(自然科学版) V01．48No．2 of 2009年3月 JournalXiamen Science) Mar．2009 University(Natural 人乳头瘤病毒假病毒制备方法的优化 郑 舟，周国栋，张雅丽，张 涛，杨炳春， 邱竹英，程 通。，张 军，夏宁邵 (厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心．生命科学学院。福建厦门361005) 摘要：人乳头瘤病毒假病毒可广泛应用于中和抗体鉴定和疫苗免疫性评估等研究．本研究对多质粒共转染293FT细胞 生产HPV假病毒的方法进行了深入优化．结果显示不同的HPV结构蛋白表达质粒转染比例对于假病毒生产效率有显 著的影响．HPV主要结构蛋白L1的表达水平是影响生产效率的主要因素．L2表达质粒的用量过高或过低均不利于假 病毒的生产，而报告质粒的用量对假病毒生产效率的影响相对较小．综合比较显示．在该体系中L1和L2表达质粒和报 告质粒以合适比例(Jml：1／10：1／2)进行共转染可获得更为理想的生产效率．本研究同时也在293F1r细胞中对磷酸钙 转染方法进行了优化．通过磷酸钙与质粒用量的交叉配比试验获得了较优的转染条件．通过优化，建立了更为高效的 产效率．本研究为HPV假病毒中和实验的规模化应用提供了有利条件． 关键词：人乳头瘤病毒；假病毒制备l表达质粒 中图分类号：R373 文献标识码：A 文章编号：0438．0479(2009)02．0269．06 人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)属化，发现各质粒的转染比例对于假病毒的生产效率具 于乳多空病毒科，是一种无包膜的环状双链DNA病 有显著影响．通过进一步优化多质粒共转染比例及磷 kb． 毒，病毒颗粒直径约为45～55nlTl，基因组约8 酸钙转染条件，本研究建立了更为高效的HPV假病 HPV病毒衣壳由72个主要衣壳蛋白L1的五聚体和 毒生产方法，为HPV假病毒中和实验的规模化应用 12个次要衣壳蛋白L2构成[1]．高危型HPV感染与多提供了有利条件． 种恶性肿瘤的发生相关，其中75％的宫颈癌发生与 1材料和方法 HPVl6、18感染相关[2]．低危型的HPV感染则引起 肛门和生殖器疣，其中绝大部分是由HPV6和 1．1 材 料 HPVll感染引起[3]．由于HPV的复制具有严格的宿 1．1．1．细胞株、质粒及单克隆抗体 主特异性和细胞分化依赖性[．]，长期以来对HPV疫 苗的保护性缺乏简便有效的评估方法．近来研究发现 HPV假病毒可用于在体外有效模拟HPV的感染，以 此基础建立的中和效价评估方法与其它方法相比具有 实验室合成，分别含有经密码子优化后的HPVL1或 准确、便捷的优点[5-7]．在HPV预防疫苗的研究及对 中和活性的规模化检测中需要使用大量的HPV假病 建r10]．以上各质粒均进行CsCI密度梯度超速离心纯 毒，因此提高HPV假病毒的生产效率具有重要意义． 化．抗HPVl6L1单克隆抗体由本实验室构建． 作者已应用磷酸钙多质粒共转染方法在293FT细胞 1．1．2试剂 中建立了生产HPVl6假病毒的方法，并已有效应用 于HPVl6中和单抗的筛选[8]．本研究以该方法为基 础，进一步对HPV假病毒的生产体系进行了探索优