油桐ISSRPCR最佳反应体系的建立.pdf

林业科学研究2008。21(2)：194，199 文章编号：1001-1498(2008)02-0194-06 油桐ISSR—PCR最佳反应体系的建立 李 鹏1，一， 汪阳东2， 陈益存2， 张小平¨ (1．安徽师范大学生命科学学院，安徽芜湖241000；2．中国林业科学研究院亚热带林业研究所，浙江富阳311400) 摘要：在油桐遗传多样性研究中，为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果，综合采用单因子试验和正交设计两 各因素对ISSR．PCR反应的影响，找出最佳反应水平。正交设计选用k(34)方案，采用直观分析获得影响因素最佳反 应水平。通过综合比较分析，最终建立了油桐ISSR—PCR反应的最佳反应体系，即在20止反应体系中，TaqDNA聚合 0．20 酶1．0 mmol·L～，引物0．4 Ilg模板DNA。 U，Mgz+2．0mmol·L～，dNTP p。mol·L～，1×PCR缓冲液，40 关键词：油桐；ISSR．PCR；单因子试验；正交设计 中图分类号：S794．3 文献标识码：A Establishmentof ISSR-PCRReaction Optimum System in Oil Tree(Vernicia Tung fordii) LI Yi—Clzll2，ZHANG Pen91”，WANGYang．don92，CHEN Xiao-pin91 ofLife Normal (1．CofiegeScience，AnhuiUniversity，Wuhu241000，Anhui，China； of 31 2．ResearchInstitute SubtropicalForestry，CAF，Fuyang1400，Zhejiang，China) to of oil the factortestandthe ISSR Abstract：Toapply genetic tung tree(Verniciafordii)，bothsingle breeding wereusedto theISSR of infour DNA orthogonaldiagram optimize amplificationsystemtung factors(Taq betweentheresultsof threelevels weresomedifferences polymerase，M92+，dNTP，primer)atrespectively．There reaction was thetwo suitableISSR．PCR analysis，a system methods．Throughcompr