杨树花粉染色体加倍有效处理时期的研究.pdfVIP

林业科学990404 林业科学 SCIENTIA SILVAE SINEAE 1999年 第35卷 第4期 Vol.35 No.4 1999 杨树花粉染色体加倍有效处理时期的研究 康向阳　朱之悌　林惠斌 分裂过程的基础上，对花粉染色体加倍中减数分裂的有效处理时期以及作用持续时间 进行了研究，结果表明：(1)经秋水仙溶液处理所获得的花粉中均有一定比例的形态较 大的花粉，最高可达88%。这种大花粉经花粉染色体检查为2n=38,且均能正常萌发。 (2)一般只要是在水培40h左右，花药由淡绿色转为绿黄色以后且未变红前，也就是由 细线末期到终变期之前处理，均能取得较好的加倍效果。(3)在有效处理时期内，处理 次数与花粉得率也有一定的相关性，考虑2n花粉比率及花粉量得率，处理次数以3～5 次，每次间隔5～7h为宜。 　　关键词：毛新杨，花粉染色体加倍，减数分裂，有效处理时期，秋水仙素 STUDY ON THE EFFECTIVE TREATING PERIOD FOR POLLEN CHROMOSOME DOUBLING OF POPULUS TOMENTOSA×P.BOLLEANA Kang Xiangyang Zhu Zhiti Lin Huibin between two treatments should be 5～7 hours. Effective treating period,Colchicine 　　在杨树三倍体育种中，多采用先获得四倍体，然后再与二倍体杂交培育三倍体的 方法(Lewis,1984)，但是，由于该方法需等四倍体开花，育种时间长，而且还存在着因 file:///E|/qk/lykx/lykx99/lykx9904/990404.htm（第 1／11 页）2010-3-23 3:54:34 林业科学990404 亲本选配不当造成育种失败的危险，因此，利用秋水仙碱溶液等处理雄花芽，获得染 色体加倍的2n花粉，再使之与二倍体雌株杂交，则成为迅速获取三倍体的较为简捷、 可靠的途径之一。为了取得杨树2n花粉，除需要考虑处理的秋水仙碱溶液浓度(张志毅 等，1992)等因素外，药剂的有效处理时期亦较为关键。为研究方便起见，本文以取材 粉母细胞减数分裂过程的基础上，对花粉染色体加倍中减数分裂的有效处理时期及作 用持续时间等进行了研究。 　　1　材料与方法 　　1.1　材料 　　试验材料毛新杨雌雄花枝均采自于中国农业大学。每年大约在1月10日～2月20日 期间，采集花芽饱满的健壮花枝，用塑料布包扎严密，低温贮藏，分批于温室内(10 ℃ ～25 ℃)进行加倍处理。 　　1.2　方法 　　1.2.1　花粉加倍方法　采用秋水仙碱溶液进行2n花粉诱导，处理浓度为0.5%，处 理方法为注射法，即用微量注射器将0.5%的秋水仙碱溶液注入已在温室内水培一定时 间的雄花芽中，每天注射3次，每次30～40 μL,两次处理间隔时间为5～7 h。如次日仍 需注射，则于当晚将处理花枝移入0 ℃～4 ℃的室内，以减缓其减数分裂进程，保持处 理效用的连续性。 　　1.2.2　减数分裂过程观察　定期取水培花芽，卡诺液固定2～24 h，若暂不观察， 可移置于70%酒精中冰箱保存，醋酸洋红涂片观察。 　　1.2.3　2n花粉的统计　白杨的2n花粉粒直径远远大于正常的单倍体花粉粒，约在 之间对比明显，易于判别，因此我们将每个处理所取得的花粉混合均匀，制成3～5个 临时涂片，每片观察5个视野，统计花粉中的大花粉百分率。 　　1.2.4　花粉染色体检查　当水培的毛新杨雌花柱头分泌粘液发亮时，取加倍的大 花粉及正常花粉授粉，约5～8 h后花粉生殖核进入有丝分裂中期，此时，将雌花序取 下用卡诺液固定2～24 h，然后取少量柱头用碱性品红染色压片观察。 　　1.2.5　花粉生活力鉴定　(1)采用常规培养基法，12 h后镜检观察；(2)采用活体直 接授粉法，8～12 h后卡诺液固定，取少量柱头1 mol/L HCl中60 ℃恒温下处理10～20 min,水洗后碱性品红染色，加盖玻片轻压观察。 　　2　结果与分析 　　2.1　毛新杨减数分裂过程观察 　　在北京林业大学温室10 ℃～25 ℃的培养下，毛新杨完成从孢子母细胞到四