BTG2基因干扰重组慢病毒的制备及在A549细胞中的表达鉴定.pdf

四川医学2015年6月第36卷(第6期)　 SichuanMedical Journal,2015,Vol.36,No.6 ·795 · 肿瘤与放射治疗学 专题 doi:10.16252/ ki.issn1004-0501-2015.06.009 论著 BTG2 基因干扰重组慢病毒的制备及在A549 细胞中的表达鉴定 1 1,2 1 1 1 1△ 1 1 罗　 佳 ,张志敏 ,张　 辉 ,肖　 何 ,陈　 川 ,王　 阁 ,王　 东 ,杨镇州 (1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400042; 2.广州军区武汉总医院肿瘤科,湖北 武汉430070) 【摘要】　 目的　 用已构建好的BTG2-siRNA 重组的慢病毒表达载体包装成具有感染性的慢病毒颗粒,获得稳定 BTG2-siRNA表达的A549 细胞。 方法　 构建的 BTG2-siRNA 慢病毒表达载体,经测序后证实与标准序列一致。 将 BTG2-siRNA慢病毒表达载体与其他两种慢病毒包装载体质粒共转染293T 细胞,获得BTG2基因siRNA重组慢病毒。 感 染A549 细胞后,用25μg/ mL的嘌呤霉素筛选稳定干扰BTG2表达的A549 细胞。 CCK8 法检测感染BTG2 干扰慢病毒的 A549 细胞的增殖能力变化。 结果　 Westernblot检测提示感染BTG2-siRNA慢病毒的A549 细胞总蛋白中BTG2表达要明 显低于正常的A549 细胞。 CCK8 实验显示,感染BTG2 干扰慢病毒的A549 细胞的增殖能力增加。 结论　 成功制备了 BTG2 基因siRNA重组慢病毒颗粒,感染A549 细胞后可检测到BTG2蛋白的表达明显降低。 为进一步研究BTG2基因在 恶性肿瘤中的生物学功能与相关机制的研究奠定了基础。 【关键词】　 BTG2;慢病毒;A549 细胞 【中图分类号】　 Q 78　 　 　 【文献标志码】　 A　 　 　 【文章编号】　 1004-0501(2015)06-0795-04 Construction of BTG2-siRNA Lentiviral and Identification the Lentiviral Activity in A549 cell. Luo Jia , Zhang1 1,2 1 Zhi-min ,Zhang Hui ,et al.1.Research Institute of Surgery,Daping Hospital,Third Military Medical University ,Chongqing 400042,2.Wuhan General Hospital of Guangzhou Command,People′s LiberationArmy,Wuhan,Hubei430070,China 【Abstract】　 Objective　 BTG2-siRNA reconstructed lentiviral expressionvectorwasusedtopackinfectiouslentiviralparti- cles in order to obtain BTG2-siRNAstably expressing A549 cells. Methods　 BTG2-siRNAlentiviral expression vector was recon- structed in the sigma company and the expressed sequence was verified by direct sequencing to be consistent with st