J亚群禽白血病病毒gp85蛋白单克隆抗体的制备和鉴定.pdf

J亚群禽白血病病毒gp85蛋白 单克隆抗体的制备和鉴定球 刘丽娜1，邵华斌1，栗绍文2，杨峻1，程国富2，胡薛英2，罗青平”’ (1．湖北省农科院畜牧兽医研究所动物胚胎工程 及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉430064； 2．华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070) 摘要：制备J亚群禽白血病病毒(ALV—J)gp85蛋白单克隆抗体，采用本实验室表达的 ALV—J gp85蛋白作为免疫原，按照常规方法免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／O骨髓瘤 细胞进行融合，利用获得的杂交瘤细胞制备腹水，用辛酸一硫酸铵沉淀法对腹水进行纯化。 结果获得了5株杂交瘤细胞：lB9、1G4、3A1、3D12、5G5。杂交瘤细胞上清抗体效价均在27以 上，腹水抗体效价均在29以上。Westernblot和间接免疫荧光试验表明，单克隆抗体可以与 ALV—J gp85蛋白发生特异性反应。本研究制备的单克隆抗体为ALV—J抗原诊断试剂盒的开 发奠定了基础。 关键词：J亚群禽白血病；gp85蛋白；单克隆抗体 andIdentificationofMonoclonal Preparation AntibodyAgainst ofAvianLeukosisVirus J+ gp85 Subgroup Li LIU7nal，SHAOHuabinl，LIShaowen2，YANGJunl，CHENGGuofu2， HU Xueyin92,LUOQingpin91++ ofAnimal andMolecular ofAnimal (1．HubeiLaboratory Embryo Breeding，InsituteHusbandry Key and of Science，Wuhan，Hubei430064； Agricultural Veterinary，HubeiAcademy ofAnimal 430070) University，Wuhan，Hubei 2．College Medicine，HuazhongAgricultural Abstract：Tomonoclonal avianleukosisvirus J(ALV—J)gp85，a develop antibodies(MAbs)againstsubgroup panel ofMAbswas SP2／0with cellsfromBALB／cmiceimmunizedwith generatedbyfusing spleen purifiedproteingp85．The to theascitesinmice．Theasciteswere octanoicandammonium obtained cellswereusedprepare purifiedusing hybrldoma sulfate of cellstrains secretedMAb