MR-1S融合蛋白的表达、纯化与保存及其抗血清的制备.pdf

检验医学圆园员圆年员园月第圆苑卷第员园期摇 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 酝藻凿糟灶藻，韵糟贼燥遭藻则圆园员圆，灾燥造圆苑援 晕燥 员园援 ·愿猿缘 · 文章编号：员远苑猿鄄愿远源园（圆园员圆）员园鄄园愿猿缘鄄园缘摇 摇 摇 中图分类号：匝缘园猿摇 摇 摇 文献标志码：粤 酝砸鄄员杂融合蛋白的表达、纯化与保存及其抗血清的制备 卢仁泉，摇 张摇 菁，摇 高摇 翔，摇 郭摇 林 （复旦大学上海医学院肿瘤学系、复旦大学附属肿瘤医院检验科，上海圆园园园猿圆） 摇 摇 摘要：目的摇 通过人肌纤生成调节因子员（澡酝砸鄄员杂）基因重组表达获得酝砸鄄员杂鄄匀泽融合蛋白，纯化后制备抗 酝砸鄄员杂抗血清；同时确定该蛋白保存的稳定体系，为研究酝砸鄄员杂蛋白理化性质及其功能提供关键的原料。方法 摇 利用原核表达载体责耘栽圆员葬（垣 ），构建责耘栽圆员葬鄄酝砸鄄员杂重组质粒，转化大肠杆菌 月蕴圆员（阅耘猿），异丙基硫代半乳 糖苷（陨孕栽郧）诱导酝砸鄄员杂鄄匀泽融合蛋白表达，亲和纯化后宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼鉴定；进一步用该融合蛋白免疫新西兰兔， 制备抗酝砸鄄员杂的多克隆抗体。同时通过在不同温度条件下，对源种不同的稳定体系中保存后蛋白活性测定进行 比较，确定最合适的稳定保存体系及条件。结果摇 构建了重组质粒责耘栽圆员葬鄄酝砸鄄员杂，并在月蕴圆员 中进行可溶性表 达，经宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼鉴定确认；免疫新西兰兔获得了抗酝砸鄄员杂抗血清；确定了合适的稳定体系及保存条件。结论 摇 在非变性条件下实现了可溶性酝砸鄄员杂融合蛋白的表达和稳定保存，进一步制备的抗 酝砸鄄员杂抗血清为研究 酝砸鄄员杂的性质及功能奠定了基础。 关键词：肌纤维生成调节因子员；分子克隆；抗体 摇 摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶，责怎则蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责则藻泽藻则增葬贼蚤燥灶 燥枣 皂赠燥枣蚤遭则蚤造造燥早藻灶藻泽蚤泽 则藻早怎造葬贼燥则 员杂 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责则燥贼藻蚤灶 葬灶凿 蚤贼泽 葬灶贼蚤泽藻则怎皂 责则藻责葬则葬贼蚤燥灶摇 蕴哉 砸藻灶择怎葬灶，在匀粤晕郧 允蚤灶早，郧粤韵 载蚤葬灶早，郧哉韵 蕴蚤灶援摇 （阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 韵灶糟燥燥早赠，杂澡葬灶早澡葬蚤 酝藻凿蚤糟葬 悦燥 藻早藻，云怎凿葬灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠，阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 悦蚤灶蚤糟葬 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠，杂澡葬灶早澡葬蚤 悦葬灶糟藻则 悦藻灶贼藻则，云怎凿葬灶 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠， 杂澡葬灶早澡葬蚤圆园园园猿圆，悦澡蚤灶葬） 摇 摇 粤遭泽贼则葬糟贼：韵遭躁藻糟贼蚤增藻摇 栽燥燥遭贼葬灶贼澡藻皂赠燥枣遭则造造燥早藻灶藻泽泽则藻早怎造葬贼燥则 员杂（酝砸鄄员杂）鄄匀泽则藻糟燥皂遭灶葬灶贼责则燥贼藻灶贼澡则燥怎早澡贼澡藻 藻曾责则藻泽泽燥灶 燥枣 酝砸鄄员杂 早藻灶藻 葬灶凿责则藻责葬则藻葬灶贼鄄酝砸鄄员杂葬灶贼泽藻则怎皂葬枣贼藻则责怎则枣糟葬贼燥灶援 栽燥 凿藻灶贼枣赠贼澡藻 泽贼葬遭造藻 泽赠泽贼藻皂贼燥责则藻泽藻则增藻 贼澡藻 则藻糟燥皂遭灶葬灶贼 责则燥贼藻灶，葬灶凿 贼燥 责则燥增凿贼澡藻则藻枣藻则藻灶糟藻枣燥则 贼澡藻 灶增藻泽贼早葬贼燥灶 燥枣 酝砸鄄员杂责则燥贼藻灶 糟澡葬则葬糟贼藻则泽贼糟泽葬灶凿遭燥造燥早糟葬造 枣怎灶糟贼燥灶援 酝藻贼澡燥凿泽摇 栽澡藻 则藻糟燥皂遭灶葬灶贼 责造葬泽皂凿 责耘栽圆员葬鄄酝砸鄄员杂 憎葬泽 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 憎贼澡 责则燥灶怎糟造藻怎泽 藻曾责则藻泽泽燥灶 增藻糟贼燥则 责耘栽 圆员葬（垣 ）葬灶凿 贼则葬灶泽枣藻则则藻凿 灶贼燥 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥蚤 月蕴圆员 （阅耘猿 ），葬灶凿 贼澡藻 藻曾责则藻泽泽燥灶 燥枣 酝砸鄄员杂 则藻糟燥皂遭灶葬灶贼 责则燥贼藻灶 憎葬泽 灶凿怎糟藻凿 遭赠 泽燥责则燥责赠造鄄遭藻贼葬鄄阅鄄贼澡燥早葬造葬糟贼燥责赠则葬灶燥泽凿藻 （陨孕栽郧）援 栽澡藻 酝砸鄄员杂 则藻糟燥皂遭灶葬灶贼 责则燥贼藻灶 憎葬泽 责怎则枣藻凿 遭赠 葬枣枣灶贼赠 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠 葬灶凿 凿藻灶贼枣藻凿 遭赠 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼援 栽澡藻 葬灶贼鄄酝砸鄄员杂 责燥造赠糟造燥灶葬造 葬灶贼遭燥凿藻泽 憎藻则藻 责则藻责葬则藻凿 遭赠 贼澡藻 则葬遭遭贼鄄