RBP4分子RNAi载体的制备及对人肝细胞系LO2中ERK信号通路的影响.pdf

安徽医科大学学报摇 粤糟贼葬 哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽 酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤摇 圆园员圆 粤怎早；源苑（愿） ·愿愿猿 · ◇基础医学研究◇ 砸月孕源分子 砸晕粤蚤载体的制备及对人肝细胞系 蕴韵圆 中耘砸运信号通路的影响 员 圆 员 员 员 员 陈冠军 ，陈利春 ，钱摇 磊 ，陈摇 莉 ，陈摇 兵 ，鲁云霞 摘要摇 目的摇 制备人视黄醇结合蛋白源（砸月孕源 ）分子砸晕粤蚤 递及产生 陨砸，尚未见相关报道。该实验以 责杂蚤造藻灶鄄 载体，检测其干涉人肝细胞系 蕴韵圆 中砸月孕源 的表达后对 栽酝 糟藻则 源郾员鄄悦酝灾 质粒作为载体，构建干涉 砸月孕源 的 耘砸运员辕 圆表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响。方法摇 分别 泽蚤砸晕粤表达型质粒，转染至人肝细胞株 蕴韵圆 细胞， 构建针对砸月孕源基因表达框缘忆端和猿忆端的干涉载体及真核 并检测其对下游耘砸运员辕 圆 的表达和磷酸化以及对葡 表达载体，经测序和酶切鉴定后将载体转染蕴韵圆，砸栽鄄孕悦砸和 萄糖摄取的影响，以探讨砸月孕源 引起陨砸 的可能作用 宰藻泽贼藻则灶 遭造 贼法确定其干涉砸月孕源表达的效率，选择干涉较高 机制。 的载体用于后续实验； 宰藻泽贼藻则灶遭造 贼检测耘砸运员辕 圆 的表达及磷 酸化水平的改变，葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖的残 员摇 材料与方法 留量。结果摇 构建的真核表达载体和干涉载体经酶切、测序 鉴定结果正确，并有明显的高表达或干涉效果。宰藻泽贼藻则灶 遭造 贼 员援员摇 材料 结果表明耘砸运员辕 圆 的表达量无明显变化，砸月孕源 高表达组其 员援员援员摇 细胞、菌株与质粒摇 人肝细胞株蕴韵圆、责酝阅鄄 磷酸化显著下降，砸月孕源 干涉组其磷酸化显著上升。胰岛素 员愿 栽 灾藻糟贼 则、真核表达载 责杂藻糟栽葬早辕 匀赠早则 灾藻糟贼 则 为 刺激后砸月孕源高表达组的葡萄糖摄取明显下降，砸月孕源 干涉 安徽医科大学生物化学教研室保存；干涉载 责杂蚤鄄 组的葡萄糖摄取明显增加。结论摇 成功制备 砸月孕源 基因的 造藻灶糟藻则栽酝 源郾员鄄悦酝灾 耘曾责则藻泽泽蚤 灶 灾藻糟贼 则（粤皂遭蚤 灶公司）； 干涉载体并应用于蕴韵圆细胞中耘砸运员辕 圆通路的研究，为后续 感受态细菌允酝员园怨为本实验室自制，原愿园益保存。 砸月孕源 的进一步功能研究奠定基础。 员援员援圆摇 试剂摇 栽源阅晕粤 连接酶、限制性核酸内切酶 关键词摇 视黄醇结合蛋白源；砸晕粤干涉；蕴韵圆细胞；耘砸运员辕 圆； 栽酝 月葬皂匀 、匀蚤灶凿 、砸晕粤蚤泽 砸藻葬早藻灶贼、耘曾 栽葬择 （栽葬运葬砸葬 Ⅰ Ⅲ 葡萄糖摄取 公司）；砸栽试剂盒（云藻则皂藻灶贼怎泽公司）；质粒提取试剂 中图分类号摇 砸猿源怨援缘源 盒、凝胶回收试剂盒（粤曾赠早藻灶公司）；转染试剂 蕴蚤责 鄄 文献标志码 粤 文章编号 员园园园原员源怨圆（圆园员圆）园愿原园愿愿猿原园缘 栽酝 枣藻糟贼葬皂蚤灶藻 圆园园园（陨灶增蚤贼则 早藻灶 公司）；砸