Tex13基因非放射性原位杂交探针的制备.pdf

第32卷第1期 西安交通大学学报(医学版) V01．32NO．1 201 JournalofXi’an Sciences) Jan．2011 1年1月 JiaotongUniversity(Medical ◇技术方法．◇ Texl3基因非放射性原位杂交探针的制备 霍涌玮1，邱曙东1，周 庆2，李 莹2，聂 蓉2， FRIELP2，MITCHELLD2，SMALLC2，GRISWOLDMD2 (1．西安交通大学医学院生殖医学研究中心，陕西西安710061； 99164—4660) 2．美国华盛顿州立大学分子生物科学学院，美国Pullman 摘要：目的 研究制备地高辛(DIG)标记的Texl3(testisexpressedgene13)基因非放射性原位杂交探针，用于检测小 鼠性腺Texl3基因的表达。方珐采用RT—PCR方法扩增Texl3靶序列，将其插入带SP6和T7RNA聚合酶启动子 的pGEM—T RNA Mix为底物，经SP6 扩增，以此PCR产物为模板，以DIGLabeling RNA聚合酶和T7RNA聚合酶体外转录，分 别制备DIG标记的反义链和正义链RNA探针。结果应用正常小鼠睾丸组织非放射性原位杂交实验，证实制备的 探针具有较高的特异性和敏感性。结论DIG标记Texl3基因杂交探针的成功制备，为进一步研究Texl3基因在小 鼠性腺中的表达定位和发育规律以及它在减数分裂过程中的作用提供了实验基础。 关键词：Texl3；生殖细胞；减数分裂；RNA探针；原位杂交 中图分类号：Q492 文献标志码：A 文章编号：1671—8259(2011)01一0131-04 ofnon-radiolabeledfnsffH of1’exl3 Preparation hybridizationprobes gene HU0 Yong—weil，QIUShu—don91，ZHOUQin92，LIYin92，NIERon92， FRIELP2，MITCHELLD2，SMALLC2，GRISWOLDMD2 (1．ResearchCenterof Medicine，MedicalSchoolof Reproductive Xi’an 710061，China；2．SchoolofMolecularBiosciences， JiaotongUniversity，Xi’an State 99164—4660，USA) WashingtonUniversity，Pullman To cRNA ABSTRACT：ObjectiVeprepare digoxigenin(DIG)·labeled 1 Texl oftestis 3(Texl3 ordertodetermine3 inthemouse probes expressedgene gene)in geneexpression gon