HPV-16-11 L1双价重组杆状病毒的构建及VLP形成.pdf

JMicrobiol 2006,Vol26,No．9 ·771· 空堡丝生塑堂塑鱼瘗堂盘查2丛生2旦筮堑鲞箜2塑Chin Immunol,September ．病毒学． HPV一16—11 L1双价重组杆状病毒的 构建及VLP形成 庄敏 谷鸿喜 李迪 崔洪波 刘希君 魏兰兰 凌虹 目的将本地区流行株HPV-16L1基因与HPV-11 【摘要】 L1基因双表达于杆状病毒昆虫细 胞表达系统，组装成类病毒颗粒(vir岫like particles，VLP)。为研制同时预防宫颈癌和尖锐湿疣等多种 疾病的HPV-16-11型基因工程疫苗奠定基础。方法对本地流行株HPV-16L1基因进行亚克隆，构 建pBluescript-HPV-16L1克隆质粒，并对其测序。再将质粒中HPV-16L1基因切下，连接到pFastBacDual L1切下HPV-11 的强启动子phol后；Jg克隆质粒pSP73．HPV-11L1，连接到pFastBacI)ual的弱启动子p10 to 后，利用BacBac系统在昆虫细胞Sit)中表达外源蛋白。SDS和Westernblot鉴定HPV-16L1和 HPV-ll L1蛋白的表达量及特异性，电镜观察昆虫细胞内、呻的存在。结果 酶切和PCR法证实 L1．HPV-11 L1转移质粒连接正确，转染昆虫细胞鲫后，检测到HPV-16和HPV-11 pFastBacDual-HPV-16 Ll特异蛋白，两种蛋白的相对分子质量(肘，)相近，约56×103；电镜观察到了vIP。结论本研究利 to 用KaeBae系统构建Bacrllid，ⅢV16．ⅢIv-11L1，转染到Sit)昆虫细胞后重组外源蛋白得到高效表达， 并经电镜证实昆虫细胞内存在较大量ⅥP，用此ⅥP免疫BALB／c小鼠后产生抗L1蛋白的抗体。共 表达HPVL1蛋白可能为预防多型别HPV感染提供新途径。 【关键词】人乳头状瘤病毒16型；人乳头状瘤病毒11型；L1基因；共表达；类病毒颗粒；杆 状病毒 ofHPV二16and-11L1 thebivalentrecombinantandVUPsassembled using baculovims Coexpression genes L1 ZHUANG 3fin，GU Di，CUI by proteins Hong-xi，1IHong-bo，删xi-jun，腼，Lan-lan，11NGHong． Medical D印a，删ofMicrobiology，HarbinUniversity，HarbinJ曳坝晰，优阮 Correspondingauthor：甜Hong-xi，Emad：hxgu2432@163．tom To make耶V—16_11bivalent vaccine of}Ⅲv．16and 【Abstract】Objective engineeringcoexpression ．11L1 thebivalentrecombinantbaculovirusandVires-like theL1 using particles(岫)assembledby proteins． Metlmds皿le HPv-16L1 wassub-clonedand wasconstructedand