IRS-PCR技术在微生物型别研究中的应用.pdf

中国卫生检验杂志,--2 年- 月 第2 卷 第- 期! +O3477 T:64@A 5 C7@A;O Q@P6@;6V M7=O4ARV ，W=; ,--2 ；XA 2! I - ,$ 【综述】 ’() *+( 技术在微生物型别研究中的应用 叶杨芹，杨海慧，应春妹，于嘉屏 （上海仁济医院检验科微生物室，上海! ,） ［关键词］ ! ’() *+( ；型别；微生物 ! (.$,! ! ! ! ［文献标识码］! /! ! ! ! ［文章编号］! --0 1%12 （,--2 ）- ,$ -, ［中图分类号］ ! ! 自抗生素诞生以来，人们在同微生物的斗争中取得节节胜 利，而与此同时，严峻的现实也不断摆在广大医生与微生物研究 者面前：微生物对环境有超强适应能力，加之近年来抗生素的广 泛应用，使得院内感染的爆发流行日趋增多。如何对微生物感 染进行流行病学监控已成为研究者们的工作重点之一。 图) 接合子与目标片段连接 分子生物学型别研究作为判断微生物流行模式的主要手 段受到世界各国相关领域的广泛重视，通过它可以从遗传学 角度阐述多态性特征，比较微生物间相关性，为追溯感染来 ［］ 源，切断传播途径，进而采取有效的防治措施奠定基础 。 对于不同分型手段，根据分型能力、可重复性、准确性、应 用范围、技术操作难易等进行判断选择［, ］。限制性片段长度 多态性研究被广泛用于分子流行病学领域，但如果仅选用单 一酶切细菌染色体，往往出现酶切片段过多或过少而降低分 图* ’($ 扩增过程，再次退火延伸则可以以+,! 为引物 型能力。印迹杂交技术特异性较强，但由于需构建特异性探 ! ! 在’() *+( 中，接合子与引物的确立直接以所选择限制 针而限制了应用范围。通过脉冲凝胶电泳技术分析全基因组 性内切酶为基础，彼此间存在一段互补序列，即有严格的限 被誉为分子生物学分型金标准，但因操作复杂、消耗大，周期 定，同时又在其它序列的选择上存有极大空间。酶的确定以 长而不适用于广泛研究。稀少限制性位点 *+( 技术（345678 细菌基因组特征为根据，如基因组富含/ 、M ，则在选择高频限 9:74; 67;63=;34 3;7 *+( ，’() *+( ）技术是以侧翼含稀少限 制性内切酶时可选择识别位点富含/ 、M 的酶，而对于稀少限 制性内切酶识别位点的片段作为特异性分型的基础，该法操 制性内切酶则没有特殊要求。 作简单，目前已广泛用于型别研究。 ) #$% ’($ 技术优点 ! #$% ’($ 技术原理 利用该方法进行菌株分析，可在% N 1 O 完成操作，而且准 ’() *+( 技术是##% 年?@6@AB CD E@F:67G 等建立的一 确可靠。由于目标片段通常小于 D 2 GP ，因此可采用多种方 种用于细菌型别分析的分子生物学方法［. ］。该技术的特点是 法提取细菌 HI/ ，包括机械溶解。少量目的HI/ 即可完成 选择性扩增稀少限制性内切酶识别位点与高频限制性内切酶 *+( 扩增。因为扩增片段位于稀少限制性内切酶识别位点与 识别位点之间的HI/ 序列。通常以!#’ 作为高频限制性内 高频限制性内切酶识别位点之间，所以避免了扩增片段过少 切酶，$%#’ 作为稀少限制性内切酶。双酶酶切染色体后产生 和过多给型别分析带来的麻烦，而且扩增结果因含有稀少限 的两端侧翼同时含有这两种酶识别位点的双链HI/ 片段就是 制性位点能高度反映细菌特异性。此外由于所采用的一对接 研究对