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IRS-PCR技术在微生物型别研究中的应用.pdf
中国卫生检验杂志,--2 年- 月 第2 卷 第- 期! +O3477 T:64@A 5 C7@A;O Q@P6@;6V M7=O4ARV ,W=; ,--2 ;XA 2! I - ,$
【综述】
’() *+( 技术在微生物型别研究中的应用
叶杨芹,杨海慧,应春妹,于嘉屏
(上海仁济医院检验科微生物室,上海! ,)
[关键词]
! ’() *+( ;型别;微生物
! (.$,! ! ! ! [文献标识码]! /! ! ! ! [文章编号]! --0 1%12 (,--2 )- ,$ -,
[中图分类号]
! ! 自抗生素诞生以来,人们在同微生物的斗争中取得节节胜
利,而与此同时,严峻的现实也不断摆在广大医生与微生物研究
者面前:微生物对环境有超强适应能力,加之近年来抗生素的广
泛应用,使得院内感染的爆发流行日趋增多。如何对微生物感
染进行流行病学监控已成为研究者们的工作重点之一。 图) 接合子与目标片段连接
分子生物学型别研究作为判断微生物流行模式的主要手
段受到世界各国相关领域的广泛重视,通过它可以从遗传学
角度阐述多态性特征,比较微生物间相关性,为追溯感染来
[]
源,切断传播途径,进而采取有效的防治措施奠定基础 。
对于不同分型手段,根据分型能力、可重复性、准确性、应
用范围、技术操作难易等进行判断选择[, ]。限制性片段长度
多态性研究被广泛用于分子流行病学领域,但如果仅选用单
一酶切细菌染色体,往往出现酶切片段过多或过少而降低分 图* ’($ 扩增过程,再次退火延伸则可以以+,! 为引物
型能力。印迹杂交技术特异性较强,但由于需构建特异性探 ! ! 在’() *+( 中,接合子与引物的确立直接以所选择限制
针而限制了应用范围。通过脉冲凝胶电泳技术分析全基因组 性内切酶为基础,彼此间存在一段互补序列,即有严格的限
被誉为分子生物学分型金标准,但因操作复杂、消耗大,周期 定,同时又在其它序列的选择上存有极大空间。酶的确定以
长而不适用于广泛研究。稀少限制性位点 *+( 技术(345678 细菌基因组特征为根据,如基因组富含/ 、M ,则在选择高频限
9:74; 67;63=;34 3;7 *+( ,’() *+( )技术是以侧翼含稀少限 制性内切酶时可选择识别位点富含/ 、M 的酶,而对于稀少限
制性内切酶识别位点的片段作为特异性分型的基础,该法操 制性内切酶则没有特殊要求。
作简单,目前已广泛用于型别研究。 ) #$% ’($ 技术优点
! #$% ’($ 技术原理 利用该方法进行菌株分析,可在% N 1 O 完成操作,而且准
’() *+( 技术是##% 年?@6@AB CD E@F:67G 等建立的一 确可靠。由于目标片段通常小于 D 2 GP ,因此可采用多种方
种用于细菌型别分析的分子生物学方法[. ]。该技术的特点是 法提取细菌 HI/ ,包括机械溶解。少量目的HI/ 即可完成
选择性扩增稀少限制性内切酶识别位点与高频限制性内切酶 *+( 扩增。因为扩增片段位于稀少限制性内切酶识别位点与
识别位点之间的HI/ 序列。通常以!#’ 作为高频限制性内 高频限制性内切酶识别位点之间,所以避免了扩增片段过少
切酶,$%#’ 作为稀少限制性内切酶。双酶酶切染色体后产生 和过多给型别分析带来的麻烦,而且扩增结果因含有稀少限
的两端侧翼同时含有这两种酶识别位点的双链HI/ 片段就是 制性位点能高度反映细菌特异性。此外由于所采用的一对接
研究对
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