三聚氰胺多克隆抗体的制备、分离纯化及ELISA方法的测试研究.pdf

第11卷第5期 中国食品学报 V01．1lNo．5 2O l 1 年8月 ofChineseInstituteofFoodScienceand 01 1 Journal Technology Aug．2 三聚氰胺多克隆抗体的制备、分离纯化及 ELISA方法的测试研究 李 昊啦 翁惠玲I 黄启龙3 沈晓妙1 高小尧t 严晟雯， 张志善， 王浙峰， 饶平凡1 (1福州大学生物工程研究所福州3500022福州蓝昊生物医药有限公司 福州350002 3福建出入境检验检疲局福州350001) 摘要目的：制备具有高特异性的三聚氰胺多克隆抗体．建立三聚氰胺快速检测方法。方法：通过抗原偶联嫁接 技术，将不具备免疫原性的三聚氰胺与特定蛋白连接。制备免疫抗原(MBlst、MB2st、KM和ML2)。时家兔进行皮 下多点注射，初次免疫后取抗体血清，用SDS—PAGE检测血清中I$的产生情况。采用酶联免疫吸附法测定各 抗体血清的效价，最终以亲和层析法纯化血清。获得高特异性的抗体。将纯化后的抗体包棱于酶标板上。建立三 聚氰胺ELISA方法．并验证其有效性。结果：通过SDS—PAGE证明免疫前、后血清中IgG显著增长。进一步使用 间接ELISA法测得各兔血清效价。MBlst免疫的效果最佳，其抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的36．97％ 上升至纯化后的75．57％。MB2st免疫的抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的30．80％上升至纯化后 92．43％。KM免疫的抗体血清效价较低．其对三聚氰胺的竞争率由纯化前的11．95％上升至纯化后的96．09％。 ML2免疫效价低．且其抗体血清在纯化前、后均对三聚氰胺没有显著的竞争性。由此建立ELISA方法，并初步验 证了谊方法的有效性。结论：本试验中制备的三聚氰胺抗体血清．经分离、纯化后得到对三聚氰胺具有较高竞争 性的多克隆抗体。为建立酶联免疫方法．以检测食品中三聚氰胺含量提供了理论基础。 关键词 三聚氰胺；多克隆抗体；酶联免疫吸附；素和层析；特异性 1)05-0169-07 文章编号1009—7848(201 2008年9月在中国爆发了三鹿婴幼儿奶粉使用昂贵的设备．因此对原料及产品进行实时检 事件【“．导致食用该奶粉的婴幼儿出现肾结石病 验受到限制。酶联免疫吸附法是根据抗原抗体的 症，其主要原因是奶粉中含有i聚氰胺。该事件曝 特异性结合反应和酶的高效催化作用相结合。对 光后．三聚氰胺一度引起全国乃至世界范围内的 三聚氰胺进行定量、定性检测。采用酶联免疫吸附 高度关注。因此，如何简便、快速、有效地检测三聚 法检测i聚氰胺具有更多的优势[21。该方法不仅不 氰胺成为舆论关注的话题。 需要昂贵的设备，操作简单。而且能够一次性对大 三聚氰胺是一类微毒性的化学物质．是基本 批量样品进行同时检测。制备具有抗三聚氰胺特 的有机化工原料．是不能作为食品或饲料添加剂 异性的多克隆抗体，便可根据酶联免疫吸附原理， 使用的。目前用于检测食品及饲料中三聚氰胺的 建立快速、简便、费用低的三聚氰胺检测方法。 方法主要有高效液相色谱法、气相色谱一质谱联用 法和液相色谱一质谱／质谱法，然而这些方法需要 1材料与仪器 1．1 材料 健康家兔4只．雄性，兔龄6～8周。体重1．5． 收稿日期：2010-08—30 基金项目：科技型中小企业技术创新基金创业项目(No． 2．0kg，购于福州吴氏实验动物中心。