2,4-二硝基氟苯柱前衍生法测定植物中谷氨酸脱羧酶的活力.pdf

第37卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第3期 Chinese of 2009年3月 Journal 347～350 AnalyticalChemistry 2，4一二硝基氟苯柱前衍生法测定 植物中谷氨酸脱羧酶的活力 吕莹果 张晖+ 孟祥勇 王立 郭晓娜 陶冠军 (江南大学食品学院，无锡214122) 摘 要建立了2，4一二硝基氟苯(FDNB)柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定植物中谷氨酸脱羧酶 GABA，HPLCLiehrospherC。。色谱柱分离。在360nm下检测衍生物，从而得到生成GABA的含量，及不同植物 组织中的GAD活力。本方法的线性范围0．2—5g／LGABA(r=0．9954)，精密度RSD为0．21％、回收率高，且 衍生化产物在一个月内都能保持稳定。用本方法测定得出稻米和茶叶中均有一定的GAD活力。在稻米组织 中，GAD主要分布在米胚芽中，米糠也具有相对较高的GAD活性，为开发富含GABA的糙米食品提供了 ‘ 依据。 关键词柱前衍生化，高效液相色谱，2，4-二硝基氟苯，谷氨酸脱羧酶，7-氨基丁酸 引 言 7．氨基丁酸(GABA)广泛存在于植物、动物和微生物中，是一种中枢神经系统中的抑制性神经递 质，具有许多重要的生理功能，如降血压、保持神经的安定、增进脑活力、营养神经细胞、促进生长激素分 泌、保肝利肾等¨’21，在医药和食品中有广泛的应用。谷氨酸脱羧酶(GAD)可以专一的催化三一谷氨酸脱 羧转变成GABA。而利用植物内源的GAD富集和制备安全食用的GABA具有重要的意义。据报道，稻 米和茶叶具有较高的GAD活力¨’41，测定这些植物组织中的GAD活力将为利用其中的GAD富集 GABA提供依据。 选方法。GABA的测定方法通常有液相色谱法、纸层析法、毛细管气相色谱法等。液相色谱法因其具有 分离度高、选择性好等优点，更加适合于GABA的精确测定。由于GABA对电化学和紫外．可见光不灵 敏，因此用直接方法进行测定比较困难。而通过采用衍生化的方法，使GABA和衍生化试剂在一定条 件下反应，形成具有荧光或紫外吸收的物质，从而实现对GABA的定量。 目前所采用的氨基酸分析法，在柱前或柱后衍生化后，大多数都用价格昂贵的荧光检测器进行测 C，。柱上分离测 定。明永飞等¨1采用荧光试剂咔唑-9一乙基氯甲酸酯(CEOC)作为衍生试剂，在Hypersil 定了GABA。近年来已有人采用一些新的衍生化试剂和方法，改用紫外吸收法直接测定，取得了成功。 其中利用邻苯二甲醛(OPA)衍生化测定GABA的报道较多¨”。，张晖等110J用OPA柱前自动衍生．紫外 检测米胚芽中的GABA含量，精确度高、操作简单，但OPA衍生化产物极不稳定，必须在几分钟内完成 进样，不便于常规检测。由于GABA的生理功能日渐受到关注，开发一种准确、快速、稳定的GABA测 定方法具有重要意义。2，4一二硝基氟苯(FDNB)与氨基酸衍生化反应简便、衍生产物稳定、反应灵敏度 高，已被用于多种氨基酸的测定¨L”1。Effatot3]和Hassan¨41分别用该法测定了小剂量和人血浆中的镇 没有采用FDNB衍生化测定的报道。 定确定植物组织中GAD的活力，GABA的衍生化反应如下： 2008-09-23收稿；2008—11—17接受 科研创新开放基金资助 々E—mail：lydia．Iv@yahoo．130111．t3rl 万方数据万方数据 348 分析化学 第37卷 OH N02 OH