5种寄生蚌螨COI基因片段序列及系统发育分析.pdf

蛛形学报ActaArachnolo#caSinwa，Nov．2010，19(2)：81—86ISSN1005—9628 doi：10．3969／j．issn．1005—9628．2010．02．004 5种寄生蚌螨COI基因片段序列及系统发育分析 吴浩彬谢彦海文春根’郭维 南昌大学生物科学系，南昌330031 摘要：采用PCR技术对5种寄生蚌螨COI基因片段进行序列测定。序列分析的结果表明，比对后的序列总长 度均为658bp；其中A、G、C、T4种碱基的平均含量分别为34．6％、20．2％、14．3％、30．9％，平均嘧啶含量(65．5％) 明显高于嘌呤含量(34．5％)，说明碱基存在偏向性。弯弓蚌螨Unionicolaarcuata与Y纹蚌螨uyps／／ophora 的种间遗传差异为26．4％，达到属间分类水平，结果支持Vidrine将沃蚌螨亚属从寄蚌螨亚属中分离的修订；螫 爪蚌螨Uche／ata与敏捷蚌螨uag／／ex之间遗传差异为23．3％，达到属间分类水平，结果支持文春根等将敏捷 lumbaria放入韦蚌螨亚属中的修订。以营自由生活的厚蚌螨u 蚌螨与其姊妹种腰蚌螨u crassipes作为外 类群，使用PAUP4．0b10软件中的最大似然法(ML)和邻接法O∽构建系统树，结果显示：在5种寄生蚌螨中 敏捷蚌螨可能是最早从祖先种分化出来的种；弯弓蚌螨与Y纹蚌螨可能起源于蚌螨属的同一个祖先。 关键词：蚌螨；COI基因；序列分析；系统发育 蚌螨的多数种类营寄生生活；少数种类营自由生活。其个体发育过程中与淡水蚌类、螺类和海绵的 et 蚌螨属的8个亚属(金道超1997；文春根等，2008；Vidrine 02．，2008)。 于它们结构和功能的不同，各基因区域也被用于分析不同分类水平的系统发育关系，其中细胞色素氧化 酶I(COI)基因被广泛用来分析动物亲缘关系较近的种、种下分类阶元以及地理种群之间的系统关系 et (Navajas 能够限定的形态特征太少，从而影响一些蚌螨近似种的分类地位。因此，分子生物学技术也用于对蚌螨 et et 的近似种与隐蔽种鉴定(Edwards02．，2004；Ernsting02．，2006)。本文通过对洞庭湖和洪湖分布广泛的 5种寄生蚌螨线粒体COI基因片段进行比较，分析其COI序列在种间的差异i并且通过构建系统发育 树推演寄生蚌螨种间分子系统进化关系，以期为蚌螨的分类及其系统演化提供基础资料。 l材料与方法 1．1实验材料 蚌螨采自洞庭湖和洪湖中的淡水贝类和螺类。寄生蚌螨在盛清水的培养皿内离体培养2~3天，除去 粘附在身上的杂物，然后固定于75％乙醇中，并放入一20℃冰箱中保存备用。 1．2实验方法 1．2．1基因组DNA的提取 参照温硕洋等(2003)制备痕量DNA模板的方法，每种寄生蚌螨取1个个体提取总DNA。提取后， 用1％的琼脂糖凝胶电泳检测其质量后，放入4℃冰箱中备用或一20℃条件下保存。 1．2．2PCR扩增 以寄生蚌螨基因组DNA为模板，采用l对通用引物对蚌螨线粒体DNA的COI基因进行扩增。引 物序列为： ’通讯作者(Corresponding author)E-mail：cgwen@ncu．eclu．ell 收稿日期(Received)：2010—07-22 国家自然基金；江西省教育厅科技项目(GJJ09055)；江西省自然基金(0630122)资助项目 万方数据 82 蛛形学报Acta Sinica V01．19No．2 Arachnologica FCP：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATAr丌GG-3’： RCP：5’．TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA．3’ 25 PCR反应体系：10xPCRBuffer mmol／LdNTPS pL