PCR技术应用十一病毒学诊断.pdfVIP

中国试剂网 3.9.55 PCR 技术应用十一：病毒学诊断 甲型肝炎病毒是甲型肝炎的病原体. 甲型肝炎呈世界性分布，其传染源是甲型肝 炎病人及病毒携带者.HAV 主要随粪便排出，但在血液、唾液、胆汁和十二指肠 液也可查出.本病的传播主要是通过粪-- 口途径，如经日常生活接触传播，经污染 饮水或食物而传播.其中无黄疸型肝炎患者容易漏诊或误诊，是重要的传染源， 具有重要的流行病学意义.除病人外，还有亚临床感染，其无症状或有较轻微病 状，转氨酶轻度升高，血清中可查出抗 HAVIgM ，粪便中可检出 HAAg 或 HAV 颗粒，亦是不可忽视的较重要的传染源. 甲型肝炎病毒经粪-- 口途径进入消化道后，首先在肠上皮和局部淋巴结细胞 内繁殖，然后进入血液形成病毒血症，经血液循环到达其靶器官--肝细胞中定居 繁殖，引起肝功能异常，出现发热、巩膜黄染、小便浓茶色、恶心、厌油腻、血 清转氨酶升高等症状或体征. 甲型肝炎病毒为单股正链 RNA 病毒.直径约 27nm 、呈20 面立体对称的球形 颗粒，1982 年国际病毒分类委员会曾将其分类为微小 RNA 病毒科肠病毒 72 型， 随着对 HAV 的不断深入研究，发现其与肠病毒属的成员有很多不同之处，国际 病毒分类委员会于 1991 年将 HAV 重新分类为小 RNA 病科肝病毒属，也有人建 义命名为肝 RNA 病毒属.它即强调了 HAV 的嗜肝性，又突出了 HAV 的基因是 RNA ，同时又与HBV 嗜肝 DNA 病毒属相对应. 一、甲型肝炎病毒的分子生物学 (一)HAV 基因组 HAV 全基因约含 7500 个核苷酸，各 HAV 株间序列中的核苷酸数略有不同. 其中 HAV 野毒株 HM-175 基因组全长 7478 个核苷酸，分 5端非编码区和 3非编 码区及居于中间的开放阅读框架区(编码区)三部分.5端非编码区是 HAV 基因组 中最保守的部分.其株间核苷酸序列一致性达 96～99%.此区共有 734 个核苷酸.5 非编码区有 2 个聚嘧啶环，邻近 5端的第一个聚嘧啶环是独特的，不为其它RNA 病毒所共有 第二个聚嘧啶环位于编码区的起点附近，与其它小RNA 病毒同源.5 非编码区含有识别和连接宿主核蛋白体的重要遗传信息.开放阅读框架区编码 2227 个氨基酸的多聚蛋白.被一个天门冬酰胺密码子分开的 2 个蛋氨酸密码中的 任何一个可能是翻译的起点.其编码多聚蛋白的基因从 5端开始可分为三个区， 中国试剂网 3.9.55 即P1 区、P2 区和 P3 区.P1 区编码 4 个衣壳蛋白 1A～1D，通常称为VP1 、VP2 、 VP3 和 VP4.VP1 最大可能和 VP3 一起构成抗原的免疫决定簇.P2 区是转录及基 因调控区.P3 区编码非结构蛋白 3A、3B、3C 和 3D，HAV 蛋白 3B 可共价结合于 HAVRNA5端，与启动 RNA 的生物合成或与病毒的装配有关;HAV3D 蛋白为依 赖 RNA 的RNA 多聚酶.代表了多聚酶的活性部位. P1 区:位于 HAVRNA735～3107 位核苷酸区域，为 HAV 衣壳蛋白编码区， 可编码 791 个氨基酸.从 5端开始按其次序分别称为 VP4(735～803)，VP2(804～ 1469)，VP3(1470～2207) ，VP1(2208～3107). (二)HAVRNA 的基因型 HAV 只有一个血清型.但通过对 HAV 核酸序列分析，发现HAV 有若干个基 因型.1991 年 Robertson 用 HAVP1 区 VP1 基因的不同片段作为分型标准，将 22 株来自世界不同地区的 HAV 分为三个基因型( Ⅰ～Ⅲ型) ，199