激光扫描共聚焦显微镜样品制备的改进方法用于8种纤毛虫表膜的观察.pdf

第32卷第2期 电 子 显 微 学 报 V。1．32，N。．2 Electron 2013-04 ofChinese 2013年4月 Journal MicroscopySociety 文章编号：1000—6281(2013)02—0163一05 激光扫描共聚焦显微镜样品制备的改进方法 用于8种纤毛虫表膜的观察 陈 晶，肖莉杰，余丽芸 (黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江大庆163319) 摘 要：采用KMnO。作为固定剂，对传统的免疫荧光细胞化学技术进行改进，将制备好的样品用激光扫描共聚焦 显微镜进行连续断层扫描和三维重建，清晰地呈现了8种纤毛虫的表膜以及纤毛模式，为原生动物纤毛虫表膜研 究提供了一种可供借鉴的样品制备方法。 关键词：纤毛虫；激光扫描共聚焦显微镜；表膜 3．02．012 文献标识码：A doi：i0．3969／j，1000—6281．201 中图分类号：Q336；Q959．1l；TGll5．21 Harbinensis 原生动物个体微小，且细胞特化程度高，许多重 sp．)、片尾虫(Urosoma sp．n．)、织毛虫 要结构常无法直接观察，因此对其研究必须依赖于 (Histriculus 显微镜以及各种染色制片技术的帮助。现今对原生 weissei)以及新醒目虫(Neokeronopsisspectabilis)。主 动物纤毛虫的形态学研究大多仍沿用常规的银浸法 要于春秋两季(4～6月、9～10月)采自黑龙江省哈 和改进的蛋白银染色法以及一般的电镜方法H’“。 尔滨市五常地区的清澈溪流，选生长状态良好的大 confocal 激光扫描共聚焦显微镜(1aserscanning 草履虫进行单克隆培养，喂以含产气杆菌丰富的稻 microscope，LSCM)的诞生，开创了免疫荧光细胞化草水，其余纤毛虫镜检分离后于实验室内用 学技术的新领域，目前已运用到原生动物学实验 由[3—81 1 O paramecium)为食，获得较多生长状态良好的单克隆 陈晶等采用KMnO。作为固定剂，对传统的免疫个体用于实验。利用间期细胞移接法对正常的单体 荧光细胞化学技术进行了大胆改进，将制备好的样 棘尾虫进行显微手术获得左右对称镜像骈体棘尾 品用激光扫描共聚焦显微镜进行连续断层扫描和三 虫‘9I。 维重建，很好的呈现了草履虫的口胞器与消化胞器 1．2主要试剂 结构”。。陈晶等采用这种改进的免疫荧光细胞化 学技术，追踪了贻贝棘尾虫的消化过程，应用激光扫 Cruz公司；anti—goat 描共聚焦显微术，清晰地呈现出贻贝棘尾虫体内圆 5018)购自SIGMA公司；防荧 公司；anti—goatIgG(G 泡状结构的三维立体构像’61。为证实这种改进的 光猝灭剂n—Propyl 样品制备方法，是否同样适用于其它纤毛虫的激光 司；TritonX一100购自Amresco公司。 扫描共聚焦显微镜观察，本研究对8种原生动物纤 1．3实验方法 毛虫进行了实验。 采用陈晶等¨o自创的固定剂配方，于实验前12