脊尾白虾全人工繁育及其繁殖相关基因研究.pdf

谨以此论文献给： 敬爱的导师赵法箴院士、李健研究员 与我风雨同舟的妻子马洪瑞女士 梁俊平 脊尾白虾全人工繁育及繁殖相关基因的研究 脊尾白虾全人工繁育及繁殖相关基因的研究 摘 要 本研究首次解决了脊尾白虾全人工繁育技术，提出了人工控制亲虾同步性成熟的方 法，以及受精卵人工孵化及幼体选优的方法，明确了幼体孵化、培育的适宜温度和盐度 范围。同时借助分子生物学手段，克隆了脊尾白虾卵黄蛋白原(Vg)、卵黄蛋白原受体(VgR) 和蜕皮激素受体(EcR)基因，并分析了 Vg 、VgR 和 EcR 基因在脊尾白虾繁殖过程中的表 达特征。主要结果如下： 一、脊尾白虾亲虾人工培育 1、脊尾白虾卵巢解剖结构与组织学特征 取卵巢发育不同阶段的脊尾白虾雌虾卵巢，研究了卵巢结构、组织学特征以及卵黄 蛋白积累。结果显示，脊尾白虾卵巢一对，左右对称，中间分离，前后端愈合，成熟的 卵巢外形呈“⊥” 型或“橄榄球”型。随着卵巢发育，性腺指数逐渐增大，卵巢成熟 时(IV 期)最大，排卵后(V 期)又降到最小；组织学特征显示，在卵细胞增殖期，细胞核 清晰可见，一般能观察到 1-2 个沿核膜内侧分布的核仁，同时随着卵细胞逐渐成熟，卵 原细胞周围的滤泡细胞逐渐增多，卵原细胞的卵黄蛋白逐渐增多。卵细胞成熟时，并未 观察到类似对虾的皮质棒，明显的标志是细胞核消失，滤泡细胞数量减少。排卵后的恢 复期，细胞核重新出现，卵原细胞又开始增殖，卵黄蛋白重新开始积累。 2、脊尾白虾亲虾人工培育及其同步性成熟调控方法的建立 提出了一种全人工培育脊尾白虾亲虾的方法，在 24°C 、26°C 温度下，分别经过 120 天和 110 天的培育，80%雌虾性腺可达到成熟。此方法可切断其病原传播途径，在人工 控制的养殖环境下实现脊尾白虾性腺同步发育成熟，为培育出健康优质脊尾白虾苗种打 下良好的基础。 二、脊尾白虾受精卵人工孵化 1、不同温度和盐度对脊尾白虾胚胎发育速度的影响 选用实验室内人工控制交尾的脊尾白虾，研究了不同温度和盐度对脊尾白虾胚胎发 育的影响。结果显示，5-30 盐度范围内，盐度 20 时的孵化时间最短，但与 5、10、15、 I 脊尾白虾全人工繁育及繁殖相关基因的研究 25 、30 盐度组无显著差异(P0.05) 。脊尾白虾胚胎发育的生物学零度为 12.18°C，有效 积温为 3828.27°C•h 。在 15-28°C 范围内，温度对脊尾白虾胚胎发育影响显著，胚胎发 育时间随着温度升高而呈双曲线性缩短，而胚胎发育速度随着温度的升高而呈直线性加 快，但当温度超过 30°C 时，胚胎无法正常完成发育。因此在脊尾白虾育苗中，幼体孵 化温度不应低于 12°C，最高不超过28°C ，盐度控制在 5-30 范围内即可。 2、脊尾白虾受精卵人工孵化及幼体选优方法的建立 提出了一种脊尾白虾人工室内孵化及幼体选优的方法。主要包括以下特点：通过调 节水温，可调控受精卵发育速度；可以将活力强幼体与活力差幼体、死亡幼体很好地分 离，幼体变态为仔虾的存活率在 85% 以上；每尾抱卵虾单独培育，幼体孵化后亲缘关系 明确，可用于家系建立及选择育种。 三、脊尾白虾幼体人工培育 1、不同温度对脊尾白虾幼体变态存活的影响 选用实验室内人工控制交尾的脊尾白虾，研究了不同温度对脊尾白幼体变态、存活 的影响。结果显示，在盐度为 31 的条件下，脊尾白虾幼体变态发育速度随着温度的升 高而加快，18°C、20°C 、22°C 、24°C 、26°C 和 28°C 各实验组开始出现仔虾的时间依次 为 17、14、11、9、8 和 8 d，各组 90% 以上幼体变态为仔虾的时间依次为21 、18、15、 14、11 和 11 d。各实验组在幼体变态过程中存活率都呈明显的阶梯式下降趋势，且28°C 组的存活率下降最快，但当存活幼体全部变为仔虾时，各实验组间的存活率并无显著性 差异(P0.0