pdf高效液相色谱法测定寡糖链结构.pdfVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究报告 第 3期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 3月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 291～295 研 究 报 告 高效液相色谱法测定寡糖链结构 郑小迅 　李 　泽 　杜嘉木 　唐思伟 　白　晨 (复旦大学生命科学学院 , 生命医学研究院 , 上海 200433) 摘 　要 　以葡聚寡糖为模型分子 ,经甲基化 , 乙酰氯 /盐酸裂解 , ( + ) MNB 甲酸荧光衍生化及高效液相色谱 分析 ,建立一种新的寡糖链结构分析方法 。该方法可以同时获得组成单糖种类 、糖链分支位点及组成单糖的 D , L 构型 3种结构信息 。操作简单 ,分析灵敏度为 0. 2 pmol,分析周期在 5 h 以内。 ( ) β 关键词 　寡糖 , + 2 甲基 2 萘基 苯并 1, 3二氧杂环戊烷 4甲酸 ,手性荧光试剂 ,高效液相色谱法 1　引　　言 寡糖链的结构分析是糖类结构及功能研究的重要内容 ,它包括组成单糖种类 、糖链分支位点及组成 单糖 D , L 构型三个方面 。现阶段应用于糖链结构研究的有效分析方法是经典的甲基化 气相色谱 质谱 ( ) 甲基化 GCM S 法 ,可以获得上述前两种信息 。糖 D , L 构型分析方法的报道较少 ,现有报道多是有关 单糖的构型分析 。例如手性固定相 GLC 方法 [ 1 ] 、手性固定相 H PLC 方法 [ 2 ] 、手性衍生化试剂 Th iozo li [ 3 ] 1 13 [ 4 ] dine 4 carboxylate方法 以及 H 及 C NMR 方法 等 。目前寡糖链 的结构研究仍需要通过 NMR、 [ 5 ] ( ) β FABM S及 GCM S等方法组合 ,才能得到上述 3种信息 。 + 2 甲基 2 萘基 苯并 1, 3二氧杂环戊 ( ( ) ) [ 6 ] [ 7 ] 烷 4 甲酸 + MNB 甲酸 是一种高灵敏度的荧光手性分析试剂 , 曾用于氨基酸 、中性单糖 的 ( ) ( ) D , L 构型分析 。本实验将糖类的甲基化分析方法与 + MNB 甲酸衍生化高效液相层析 HPLC 方法 结合 , 以葡聚寡糖为模型 ,创立了可同时获得 1, 2 , 3三种信息的高灵敏度寡糖链结构分析方法 。 2　实验部分 2. 1　试剂与仪器 ( ) ( ) A gilen t 1100 高效液相色谱仪 美国 A gilen t公司 ; DMX 500 核磁共振仪 德国 B ruker公司 ;正相 μ