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pH条件和接种量对褐环乳牛肝菌生长影响热 [ 作者：刘淑清，陈有君，包?健，闫?伟?|?转贴自：本站原创?|?点击数：262?|?更新时间：2009-4-8?|?文章录入：imste???2008年?第?22?期 ] (1内蒙古农业大学 生物工程学院；2内蒙古农业大学 林学院，内蒙古? 呼和浩特 010018)摘 要： 为了寻找褐环粘盖牛肝菌的最佳培养条件，本实验以Pach培养基为基础培养基，通过液体培 养，在缓冲体系(磷酸二氢钾——柠檬酸缓冲液,缓冲液按体积占培养基总体积20%)和非缓 冲体系下，比较研究了接种量(分别为1，2，3，4，5块，每块大小为5×5mm2，选生命力 强的菌丝)和pH(分别为2.5，3.5，4.5，5.5，6.5，7.5)对褐环乳牛肝菌(SP9)生长的 影响。结果表明：褐环粘盖牛肝菌生长的最适pH为4.5左右，最佳接种量为4块。添加了缓冲 液的菌丝生长更旺盛。关键词：褐环乳牛肝菌；pH值；接种量中图分类号：S718.52? 文献标识码：A? 文章编号：[ HTK]1007—6921(2008)22—0029—03 褐环粘盖牛肝菌 ［Suillus luteus (L.:Fr) Gray］隶属于担子菌纲、伞菌目、牛肝菌科、 粘盖牛肝菌属,是一种能与松属植物共生的菌根真菌，它可以产生多种植物生长激素和生长 调节物质，促进林木发育。对其宿主植物在逆境(干旱，盐碱，病害)中的生长和发育有着积 极作用。将其做成菌根菌剂后将有巨大的市场空间，能取得明显的增产效果和经济效益。该 菌的子实体不但营养丰富，还可以入药，有较高的食用价值和药用价值。但其人工培养生长 缓慢，老化快，使其生产、应用甚至研究都遇到了很大的困难，研究环境条件对其影响是寻 找其快速高效培养的重要手段之一。pH值是影响褐环乳牛肝菌生长的重要因素,因而也受到 了众多研究者的关注，但关于该菌生长的最适pH条件的研究，不同的研究者得出的范围相差 很大。雷增普等在田间试验中发现褐环粘盖牛肝菌具有抗碱(土壤pH8.6)的能力［1］。赵志鹏等室内纯培养结果表明褐环粘盖牛肝菌喜中性生长条件［2］。张茹琴利用 纯培养方法测定了pH值对粘盖牛肝菌、褐环粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌3种外生菌根真菌生长 的影响,以及重金属处理和外生菌根真菌培养前后培养基pH值的变化［3］。结果表明 ,在pH值4.1～7.1的范围内3 种外生菌根真菌均可生长,其中褐环粘盖牛肝菌为5.3～6.7。而陈连庆等人研究表明pH4.5时 褐环粘盖牛肝菌生长最好［4］。刘杨研究发现缓冲浓度在30～40%，接种量为三块时 最佳pH值是4.5［5］。造成这些差异的原因可能很多，如菌株来源不同，研究方法不 同等，但有一点可以肯定，过去的研究中并没有考虑，菌的活动会使其环境pH发生变化，菌 的生命活动引起其环境pH发生改变，使得菌生长在一个pH不断变化的环境中，初始pH并非是 菌丝生命活动所真正经历的pH条件。因而要把握其生长最适的pH必须了解其对环境pH的影响 ，或者尽量控制其生长环境的pH条件，为此本文比较研究了缓冲体系和非缓冲体系中接种量 对环境pH及其生长的影响。实验材料和方法实验材料菌株来源。SP9是褐环乳牛肝菌的一个菌株，是从大青山油松(Pinus tabulaeformis )菌根上分离获得的。基础培养基的组成。本实验以Pachlewski(简称Pach)培养基为基础培养基，培养基 成分见表1： 1.2 实验方法实验处理。本实验分为有缓冲体系和无缓冲体系两类处理,每个体系下又设6个pH水平，分别为2.5、3.5 、4.5、5.5、6.5及7.5,每个pH水平菌丝接种量分别是1、2、3、4和5块，不设重复。缓冲体 系按照2.1.3中缓冲液的组成配制, 缓冲液按占培养基总体积20%的浓度加入培养基。无缓冲 体系用KOH和HCl调节pH值。培养条件。 本实验所需菌种量大，需先对SP9进行扩大培养，将菌种用接菌刀分割成边长为5mm左右的小 块，接入基础培养基中，每个培养皿接3块。25℃下培养一星期后，选取长势良好的菌种， 在超净工作台中使用双层刀片切取大小相同边长5mm左右的菌块，用接种刀分别接入液体培 养基中，25℃恒温培养箱中静置培养30天。生物量的测定。 将菌丝从液体液体培养基中取出，蒸馏水冲洗3次后收集菌丝，再于烘箱中60℃烘干，万分 之一天平测量干重。培养后的培养液用PHS-3B精密pH计测定pH值，用分光光度计测定测200 ～1 000nm的吸光度以显示色素分泌程度。结果与分析 褐环粘盖牛肝菌在不同pH条件下的生长情况 由图1可知在含有缓冲液的培养基中褐环乳牛肝菌菌丝生长明显比非缓冲体 系旺盛，图中还显示，在pH4.5的条件下，菌丝生物量随pH的升高而增大；在pH4.5的条件 下，菌丝生物量