RPHPLC测定麻黄碱手性对应异构体.pdfVIP

RP-HPLC 测定麻黄碱手性对应异构体 1* 2 2 1,2 石贵阳 , 董世建 , 卢燕 , 张梁 1．江南大学工业微生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 (214122) 2．江南大学生物工程学院，江苏无锡 (214122) E-mail ：gyshi@ 摘 要：用RP-HPLC 分离测定了生物转化液中的l-麻黄碱、d-伪麻黄碱及前体物质 1-苯基 -2- 甲胺基丙酮（1-phenyl-2-methylamine-acetone，MAK ），采用ZORBAX SB-C18 柱，UV 检测器，以 0.02mol/L 的V(KH2PO4):V( 甲醇)：V(醋酸)：V(三乙胺) ＝96：4：0.1：0.13 作 为流动相，体积流量1mL/min，柱温35℃，检测波长210nm ，MAK 、l-麻黄碱、d-伪麻黄碱 的检出限分别为0.05 ，0.2 ，0.1mg/L ，分别测定了两株菌生物转化液中的MAK 、l-麻黄碱、 d-伪麻黄碱的质量浓度，回收率为97.2% ～99.3%。 关键词：高效液相色谱法；MAK；l-麻黄碱；d-伪麻黄碱；生物转化 中图分类号：O 657.72 文献标识码：A 1 引言 麻黄碱是重要麻黄的主要活性成分，其化学名称是 1-苯基-2- 甲氨基丙醇，分子式为 C H NO 。因为分子中有两个手性碳，故有四种旋光构型体，其中构型为1R2S 的麻黄碱也 10 15 称赤藓糖型麻黄碱，又叫l-麻黄碱，或直接称麻黄碱；其立体异构体1S2S 构型属于苏糖型， 称d-ψ-麻黄碱、d-伪麻黄碱，或直接称为伪麻黄碱，结构式如图 1。这两种麻黄碱均具有松 弛平滑肌、收缩血管、抗炎、抗菌、抗病毒、镇咳平喘等功效[1] 。临床主要用于支气管哮喘、 过敏性反应、鼻粘膜肿胀以及低血压等病的治疗。 传统的麻黄碱生产不仅不能满足市场需求，而且还带来严重的生态破坏问题[2] 。利用微 生物体内一些具有高度立体选择性的酶或酶系作催化剂，制备手性药物具有许多有点，特别 是转化率高和产物单一，作者利用前体物质1-苯基-2- 甲胺基丙酮（MAK ），经生物转化可 直接生成麻黄碱或伪麻黄碱。 OH OH CH3 CH 3 NHCH NHCH 3 3 图1 l-麻黄碱和d-伪麻黄碱结构图 Fig. 1 Structural formula of l-ephedrine and d-pseudoephedrine [3] [4] 已报道的麻黄碱的测定方法很多，如毛细管电泳法 及气相－质谱法 。但还是以高效 液相法最多，如离子对高效液相色谱法等[5] ；有人以(-)-氯甲酸薄荷醇酯作为手性衍生化试 [6] 剂，l-麻黄碱与d-伪麻黄碱衍生化后生成一对非对映异构体，再用反相高效液相色谱检测 ， 虽然能够分离两种麻黄碱，但是需要手性衍生化处理样品。此外还有人用薄层层析法分离了