农副产品中微生物的测定.docxVIP

XXX实验室检测中心 管理体系文件 作业指导书 （第A版 第0次修改） 文件编号： 编写： 审核： 批准： 批准日期： 受控状态：□ 受控 □ 非受控 正副版本：□ 正本 □ 副本 持有者： 发布日期： 实施日期： 作业指导书文件编号： 第1页 共12页标 题：农副产品中微生物的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日1. 目的 使微生物的测定处于受控状态，保证微生物检测结果的准确性与一致性；规范参加本项目检测工作人员的操作规程。 2. 适用范围 适用于农副产品中菌落总数的测定和大肠菌群的计数。 3. 引用标准 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》 GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》 GB 4789.3-2010 4. 概述 菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。 大肠菌群能在37℃经24h能发酵乳糖，产生气体，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染，同时间接指出食品是否有肠道致病菌污染的可能，有利于控制肠道传染病的发生和流行。 5. 菌落总数测定 5.1 术语和定义 5.1.1?菌落总数?aerobic?plate?count? 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 5.2 设备和材料：? 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 5.2.1?恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃ 5.2.2 冰箱：2℃～5℃ 5.2.3?恒温水浴箱：46℃±1℃ 5.2.4?天平：感量为0.1g 5.2.5?均质器? 5.2.6?振荡器? 5.2.7?无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头? 5.2.8?无菌锥形瓶：容量250?mL、500?mL 5.2..9?无菌培养皿：直径90?mm? 作业指导书文件编号： 第2页 共12页标 题：农副产品中微生物的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日5.2.10?pH?计或pH?比色管或精密pH?试纸 5.2.11?放大镜或/和菌落计数器? 5.3. 培养基和试剂:? 5.3.1?平板计数琼脂培养基：见附录A?中A.1 5.3.2?磷酸盐缓冲液：见附录A?中A.2? 5.3.3?无菌生理盐水：见附录A?中A.3 5.4 检验程序 报告 计数各平板菌落数 计算菌落总数 培养 每皿中加入15ml-20ml 平板计数琼脂培养基，混匀 检样 25 g(mL)样品+225 mL稀释液，均质 10倍系列稀释 选择2-3个适宜稀释度的样品均液， 各取1ml分别加入无菌培养皿内  作业指导书文件编号： 第3页 共12页标 题：农副产品中微生物的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日5.5 操作步骤 5.5.1 样品的稀释 5.5.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。 5.5.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 5.5.1.3 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 5.5.1.4 按5.5.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。 5.5.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 5.5.1.6 及时将15 mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放