动物水解蛋白的测定.docVIP

乳与乳制品中动物水解蛋白L－羟脯氨酸测定法三：方法 fggdj分光光度计　来源：东海仪表　更新：2009-9-3 14:37:00　【字体：大 小】 ,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否含有动物水解蛋白。 乳与乳制品中动物水解蛋白L－羟脯氨酸测定法四：样品的前处理 fggdj分光光度计　来源：东海仪表　更新：2009-9-3 14:40:49　【字体：大 小】 称取0.5-1.0g样品，精确至0.000 1g放于水解管中。在水解管内加入浓度为12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，再加入新蒸馏的苯酚3～4滴，然后充入纯氮气，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖，将已封口的水解管放在（110±1）℃的恒温干燥箱内，水解6~12h后，取出冷却。 打开水解管，将水解溶液混匀、过滤至100 mL(V1)容量瓶中,用蒸馏水反复冲洗漏斗，并定容至刻度。吸取5.00～25.00 mL(视水解液中L(-)-羟脯氨酸的含量)的水解液于100 mL小烧杯中,用浓度为10 mol/L和1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为8±0.2，定容至100 mL容量瓶中,摇匀备用 乳与乳制品中动物水解蛋白L－羟脯氨酸测定法五：样品的前处理 fggdj分光光度计　来源：东海仪表　更新：2009-9-9 14:31:58　【字体：大 小】 0.5-1.0g样品，精确至0.000 1g放于水解管中。在水解管内加入浓度为12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，再加入新蒸馏的苯酚3～4滴，然后充入纯氮气，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖，将已封口的水解管放在（110±1）℃的恒温干燥箱内，水解6~12h后，取出冷却。 打开水解管，将水解溶液混匀、过滤至100 mL(V1)容量瓶中,用蒸馏水反复冲洗漏斗，并定容至刻度。吸取5.00～25.00 mL(视水解液中L(-)-羟脯氨酸的含量)的水解液于100 mL小烧杯中,用浓度为10 mol/L和1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH值为8±0.2，定容至100 mL容量瓶中,摇匀备用 乳与乳制品中动物水解蛋白L－羟脯氨酸测定法六：测定 fggdj分光光度计　来源：东海仪表　更新：2009-9-9 14:38:22　【字体：大 小】 1.标准曲线的绘制 吸取质量浓度为5mg/L的L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00，10.00，20.00，30.00，40.00mL，分别置于100 mL容量瓶中，定容摇匀。质量浓度分别为0.0，0.5，1.0，1.5，2.0 mg/L。取上述不同浓度的溶液5.00 mL，分别加入25 mL具塞试管或比色管中，加氯胺T溶液2 mL，摇匀后于室温放置20 min。再加入显色剂2 mL，摇匀，塞上塞子于60℃恒温水浴中保温20 min后取出，迅速冷却，在波长（558±2）nm处测定吸光值，绘制标准曲线。 2.试样测定 从待测液中吸取已制备好的样液5.00 mL于20 mL具塞试管中,以下按2.2.1步骤进行,同时作空白试验。 3.分析结果的计算 计算公式为 式中：X为样品中L(-)-羟脯氨酸的质量分数，（g/100g）；C为从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,（μg）；m为称取试样的质量，（g）；V1为消化液体积（mL）；A为稀释倍数；5为比色时吸取的溶液体积（mL）。 当符合允许差所规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果，结果保留小数点后两位有效数字。 同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。 测水解动物蛋白粉（也有人叫新型乳品专用蛋白粉）　目的　乳制品企业以蛋白质含量计价，部分奶农为了掺水还要不使蛋白质含量降低，同时也能够提高干物质的含量而向生鲜奶中加水解蛋白粉。　　检测方法　　原理　　用硝酸汞沉淀方法除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，并与饱和的苦味酸溶液会产生沉淀反应。　　试剂配制　　（1） 除蛋白质试剂 硝酸汞14g，加入100 mL蒸馏水，加浓硝酸2.5 mL,加热助溶,待试剂全部溶解后加蒸馏水至500 mL。　　（2)? ?饱和苦味酸 称取苦味酸3 g，加蒸馏水200mL。　　操作方法　　取5mL乳样，加除蛋白试剂5mL混合均匀，过滤，沿滤液试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.6mL形成环状接触面。　　结果判定　　按环层颜色变化判定结果（见表10）。　　? ? 表10? ?? ???环层颜色变化与判定结果对照表　环层颜色? ?? ??