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2015-10-08 发布于重庆
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影响酿酒酵母电击转化率的条件

34 2 ( ) 1999 6 Vol. 34 No. 2 JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY June 1999 * * * 秦玉静金建玲鲍晓明高东 () 以酿酒酵母为材料,用穿梭质粒pYES2 进行电击转化的件实验. 实验表明电击中电压大小细胞的生长状态处理件和电击后细胞的培养时间以及质粒浓度等对电击转化率均有影响.取对数生长期酵母细胞,用二硫苏糖醇(DTT)处理以疏松细胞壁,加0.7 Lg/mL 质粒DNA,5 kV 电压电击,转化后细胞在完全培养 5 基中培养60 min 后, 涂布选择培养基, 转化率可达4. 8@ 10 个转化子/Lg 质粒 DNA,细胞的存活率为39.2 ,比完整细胞转化的效率高,存活率偏低. ; ; Q933 (Saccharomyces cerev isiae) ,, , ,,. ,[ 1~ 5] . 1978,[1,2] ,,. [ 3] [4] , , .1985 ,Karube ,, .,, .[5] H158, BIOJET MI (B.Braun ) , ,. 1 材料与方法 1.1 - - - - ( Saccharomyces cerevisiae)H158(his trp leu ura ); * * * : : 1997-07-12 2 : 237 + r pYES2(ura Ap2L ori)E . coli S. cerevisiae . 1.2 LB:1 ,0. 5 , 1 NaCl, pH 7. 0; YPD :2 , 1 , 2 ; [6] : , 20 Lg/mL His,Trp 30Lg/ mL Leu. 1.3 ( S . cerevisiae)H158 YPD, 30 e (OD = 1.0~ 1.5),3 000 r/min, 4 e ,15 min,, 600 , (10 mmol/L Tris- HCl,pH7.5,270 mmol/L , 1 mmol/ L Mg- Cl ) .,, DNA 2 ,, 30 e 3d,. ,LgDNA . 1.4 [7] 2 结果与讨论 2.1 [8] ., , ,DNA . , ,,DNA , ; , ,, ,.1,,5kV , 1 A. B. Fig. 1 Effect of voltage ontransformation efficiency A.Transformation efficiency B.Cell viability curve 238