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* 　　 微量铁的测定 可见分光光度法 OBJECTIVE 掌握分光光度法的基本原理 2 学会光度法测定物质的含量 3 学习可见分光光度计的使用方法 PRINCIPLE 有色物质对光的吸收具有选择性，溶液的不同颜 色是由于溶液中有色物质选择地吸收各种颜色 的光引起的。有色溶液的颜色实质上是它所 选择吸收的光的互补色：当一束白光通过 铁黄色络离子溶液时，兰色光大部分被 吸收，其它色光透过. Beer-Lamber:当一束单色光通过有色溶液时部分吸收， 部分透过，有色物质对光的吸收度(吸光度A)与有色物质 的组成量度(C)和液层厚度(L)的乘积成正比. A = ELC =- lgT = - lg I I0 A: 吸光度 (absorbance) E: 吸光系数 (absorptivity) L: 液层厚度 C: 组成量度 T: 透光率(transmitance) Beer-Lamber ：物质对单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度关系的定律 Beer： 吸光与浓度的关系 Lamber： 吸光与厚度间的关系 I I0 透光率(transmitance, T) A=-lgT 吸光度 (absorbance) E 吸光系数 (absorptivity) 吸收光谱(吸收曲线) 标准曲线 A=E LC A=K’C 可见分光光度法: 是对于能吸收可见光的有色溶液的测定 方法，对于许多不吸收可见光的无色物 质可以用显色反应使之变成有色物质。 1 显色反应及其条件 因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它 故操作时，必须在平行原则的条件下进行 2 测定方法：标准曲线法 (空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素 溶剂空白：显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白 溶液 试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶 剂(不加试样溶液) 试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应 相同条件进行操作 显色剂：磺基水杨酸 pH 1.8~2.5 淡紫色 4.0~8.0 橙红色 8.0~11.5 黄色 12 沉淀 吸收波长：380~480nm范围内，选择最大吸收波长λmax(425nm) 实验条件： PROCEDURE 1　系列标准溶液和待测溶液的配制 编号 　空白 1 2 3 4 5 　 6 未知 标准溶液(ml) 　 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液) 10%磺基水杨酸(ml) 5.00 缓冲液(ml) 10 蒸馏水 稀释至50.00ml *