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中华人民共和国国家标准 农业部 869 号公告-13-2007 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂玉米 NK603 及其衍生品种定性 PCR 方法 Detection of genetically modified plants and derived products Qualitative PCR method for herbicide-tolerant maize NK603 and its derivates 农业部 869 号公告-13-2007 前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准归口全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会。 本标准起草单位：农业部科技发展中心、山东省农业科学院、中国农业科学院生物技术研究所。 本标准主要起草人：杨崇良、沈平、路兴波、孙红炜、金芜军、尚佑芬、赵玖华、宋贵文、李宁。 I 农业部 869 号公告-13-2007 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂玉米NK603 及其衍生品种定性 PCR方法 1 范围 本标准规定了转基因耐除草剂玉米 NK603 转化体特异性定性 PCR 检测方法。 本标准适用于转基因耐除草剂玉米 NK603 及其衍生品种，以及制品中 NK603 的定性PCR检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后 所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协 议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本适合于 本标准。 NY/T 672 转基因植物及其产品检测 通用要求 NY/T 673 转基因植物及其产品检测 抽样 NY/T 674 转基因植物及其产品检测 DNA 提取和纯化 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 zSSIIb 基因 zSSIIb gene 编码玉米淀粉合酶异构体 zSTSⅡ-2的基因。 3.2 NK603 转化体特异性序列 event-specif ic sequence of NK603 转基因耐除草剂玉米NK603的外源插入片段3´端与玉米基因组的连接区序列，包括NOS终止子 3´端部分序列和玉米基因组的部分序列。 4 原理 根据转基因耐除草剂玉米 NK603 转化体特异性序列设计特异性引物，对试样进行 PCR 扩增。 依据是否扩增获得预期 108 bp 的DNA片段，检测试样中是否含有耐除草剂玉米 NK603。 5 试剂、材料及溶液配制 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水。 5.1 琼脂糖。 5.2 10 mg/mL 溴化乙锭溶液：称取 1.0 g 溴化乙锭（EB），溶于100 mL 水中。 注：EB有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。 1 农业部 869号公告-13-2007 5.3 10 mol/L 氢氧化钠溶液：称取 80.0 g 氢氧化钠（NaOH），先用 160 mL 水溶解后，再加水 定容到 200 mL。 5.4 500 mmol/L 乙二铵四乙酸二钠溶液（pH 8.0）：称取 18.6 g乙二铵四乙酸二钠（EDTA-Na2 ）， 加入 70 mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液（5.3），加热至完全溶解后，冷却至室温，用氢氧化 钠溶液（5.3）调pH至8.0，加水定容至 100 mL。在 103.4 kPa（121℃）条件下灭菌