05版微生物限度检查法增修订内容.ppt

中国药典2005版微生物限度 检查法增修定内容 苏德模 中国药典2005版微生物限度检查法在检查项目、格式、语言表述等方面都有较多的增定和修订。 增订中主要的有四项：一是三菌数测定的方法验证；二是控制菌检查的方法验证；三是大肠菌群检查法；四是梭菌检查法。 前言 增订 ●微生物限度检查在环境的洁净度10000级和局部100级的单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，以防再污染。单向流空气区域、工作台面及环境必须定期按国家《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方法》现行标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 ●培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按灭菌法（见附录 XVII ）的要求采用验证合格的灭菌程序灭菌。 (培养基配制、灭菌、质量与使用) 培养温度 细菌和控制菌的培养温度未改动。霉菌和酵母菌的培养温度20-25℃ 改为 23-28℃。 抽样量和检验量虽分别单列，但突出的是检验量。 以检验量为标题，抽样量列在检验量叙述完了之后。 即一般随机抽样不少于检验用量（2个以上最小包装）的3倍量。 ●检验量 指供试品一次检验的用量。一般为10g或10ml；化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包装的药品可酌减（不得少于3g）。检查沙门菌的供试品其检验量增加10g或10ml。 培养基、试药、试液、指示液、稀释剂的配制和微生物限度标准均编排在检查法后。英美药典将培养基、稀释剂放在供试液制备之前。 ●供试液的制备 用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制备供试液或选用适宜的乳化剂、分散剂、中和剂制备供试液；其用量应验证，在该检验条件无抗菌作用。供试液制备妥后不得超过1h就加入检验用培养基。 7类供试品供试液的制备，其中非水溶性供试品 ①供试品5g，司盘80、单硬脂酸甘油酯、聚山梨酯80…… ●②供试品10g，20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠，必要时再加适量十四烷酸异丙酯，充分振摇，使供试品溶解。然后加45℃100ml pH7.0蛋白胨氯化钠缓冲液，振摇5-10分钟，萃取，待油水分层后，水层过滤，贴膜培养。 ●非水溶性膜剂供试品 二部未变动，化学药膜剂取100cm2，剪碎，加100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，作供试液(1:1)。一部中药膜剂取50 cm2，剪碎，适量的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液（50或100ml）浸泡，振摇，以供试品浸液为供试液。（SOP2000版规定:中药膜剂取30-50cm2 ，剪碎，加水100ml）。 ●肠溶及结肠溶制剂 供试品10g，加100ml pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（结肠制剂）,于45℃水浴振摇，使溶解。 ●气雾剂、喷雾剂供试品 取规定量供试品，置冷冻室冷冻1h，取出，迅速消毒供试品开启部位周围，用无菌钢锥钻一小孔，放置室温，并轻轻转动容器，使抛射剂全部抛出。以无菌注射器吸出全部药液，按标示量加稀释剂至足量（若含非水溶性成份，加适量无菌聚山梨酯-80液），使匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1∶10的供试液。 具抑菌活性的供试品 当供试品具有抑菌活性时，应将供试液中的抑菌活性消除后，方能依法检查。常用的方法有： ①培养基稀释法 取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少至不具抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级2ml供试液等量分注多个平皿，按浇碟法操作，培养、计数。每1ml供试液所注各平皿生长的菌数之和即为1ml的菌落数，取平均菌落数乘以稀释倍数的值按菌数报告规则报告菌数。 控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。 ②离心沉淀集菌法 取规定量的供试液，3000转/分离心20min（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5min，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量。 ③薄膜过滤法 采用开放式薄膜过滤器。 ④中和法 凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释剂或培养基中。 细菌、霉菌及酵母菌计数 增订 计数方法的验证 对药品进行微生物限度检查法时，首先应进 行检测方法的验证。如细菌、霉菌及酵母菌 计数方法的验证，以确认该计数方法是否科