仪器分析实验(现代分析技术)2008.docVIP

现代分析技术实验 （应用化学） 2009年8月 上海师范大学化学系 实验一 紫外可见吸收曲线的测绘及维生素B12 的含量测定 一、目的： 掌握紫外─可见分光光度计的原理和操作。熟悉测绘吸收曲线的一般方法。 二、原理： 维生素B12 是含Co 的有机物，深红色。可以用其水溶液作测量液。用与配置其水溶液相同 的溶剂─本实验为水，作为参比溶液。测不同浓度下的吸光度A 对C 作图，得吸收曲线。也可配置好溶液后在自动扫描的仪器上自动绘制出吸收曲线。 由吸收曲线可得到VB12 三个吸收峰峰位。361nm 的吸收峰干扰因素少，可依朗伯—比尔定律A=(bc 以比较法，通过测量待测液及标准溶液的吸光度。计算得到样品含量，也可以按药典规定以361±1nm 处吸光系数值（207）计算得到含量。 三、仪器药品： 紫外——可见分光光度计;比色皿 VB12 标准溶液VB12 注射液 四、实验内容： （一）吸收曲线绘制 吸收曲线方法一 1、将被测液与空白液分别盛装于1cm 比色皿中，并置于仪器中比色皿架上，按仪器使用方法进行操作。 2、从仪器上限开始每隔20nm测量一次吸光度在吸收峰谷的波段以5nm或更小的间隔测定一些点。 3、以波长为横坐标，吸收度为纵坐标绘图，得吸收曲线。 吸收曲线方法二 1、将被测液与空白液分别盛装于1cm 比色皿中，并置于仪器中比色皿架上，按仪器使用方法进行操作。 2、按仪器使用方法操作得到吸收曲线 （二）吸光系数法测含量 取维生素B12 注射液样品，按照其标示含量，精密吸取一定量，用蒸馏水准确稀释k 倍，使稀释液每ml 含量约为25μg，置1cm 石英池中，以蒸馏水作空白，在紫外分光光度计（或有足够精度的其他仪器）上，找出361±1nm 范围内的吸收峰，读取其吸光度，与48.31 相 乘，即得样品稀释液每ml 含B12 的μg 数。 （三）标准比色法测含量 （1）、标准溶液取质量较好的维生素B12 注射液，按上述方法去测定其实际含量，准确稀释k 倍，使其每ml 含B12 为50-100μg，以此溶液作为标准溶液。 （2）样品溶液参照被测样品的标示含量，精确吸取适量，用蒸馏水准确稀释m 倍，使其含量与标准含量接近。 （3）测定用蒸馏水为空白，用1cm 玻璃吸收池在分光光度计上550nm 分别测定标准溶液的吸光度（As）与样品溶液的吸光度（Ax），计算样品含量。 五、思考题： 吸收系数法中为什么吸光度乘48.31 即得每毫升VB12 的μg 数？ 实验二 红外光谱综合实验 目的和要求 通过红外吸收光谱实验 ，了解红外光谱的基本原理，初步掌握红外定性分析法。2。了解红外分光光度计的工作原理，掌握红外吸收光谱的测量技术。 二 . 基本原理 当一束连续变化的各种波长的红外光照射样品时，其中一部分被吸收，吸收的这部分光能就转变为分子的振动能量和转动能量；另一部分光透过，若将其透过的光用单色器进行色散（或傅立叶变换，就可以得到一带暗条的谱带。若以波长或波数为横坐标，以百分吸收率为纵坐标，把这谱带记录下来，就得到了该样品的红外吸收光谱图。 根据量子力学的观点，分子的每一个运动状态都属于一定的能级，处于某特定的运动状态的分子之能量E可以近似地分三部分：分子中的电子运动能，组成分子的振动能和分子的整体转动能，于是 式中n，v, J分别为电子量子数，振动量子数和转动量子数。如果这些分子在光照射下发生能级迁跃，就会产生分子对光的吸收或发射。分子由低能级跃迁到高能级时，吸收光的频率（以波数表示） 式中为光速，为普朗克常数。 其中，振动能级跃迁引起的振动光谱区出现在红外光谱区，称之为红外光谱。纯转动能级的跃迁引起的转动光谱，出现在极远红外及微波区。实际上，振动能级的跃迁伴随转动能级的跃迁，这时得到振动—转动光谱。 我们知道产生红外光谱吸收的选率有： （1）只有偶极矩会随q而变化的那些振动才会在红外光谱中出现。例如极性双原子分子HBr会得到红外光谱，而偶极矩为零的H2 , O2 ,Cl2 等非极性分子则不会产生红外光谱。 （2）在谐振子模型近似下，红外吸收只允许发生在振动量子数改变为的状态间。实际上由于振动的非谐性等原因，使得等几率较小的跃迁也成为可能。这也定性的说明了（称为基频）强度很大，（称为第一倍频）较弱， （称为第二频）则更弱的事实。在多原子分子中还会出现合频吸收带（即）。 （3）对于多原子分子，分子振动复杂的。但是这些复杂的。但是这些复杂振动3N—6个简正振动，线性分子为3N—5个）（N为分子中的原子数）。 振动类型总的可分为伸缩振动和变形振动两大类，伸缩振动主要改变键长,分为对称性收缩振动和不对称性收缩振动。变