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基于易错PCR技术的α淀粉酶基因的定向进化研究
2010N0．2
China
·94· SerialNo．215 Brewing I衄。vati。nand Tr嬲s衔
Kn。、Ⅳ1edge
基于易错PCR技术的仅一淀粉酶基因的定向进化研究
张建云1，谷立坤协，陈红歌2
(1．河南工程学院资源与环境工程系，河南郑州451191；2．河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002)
野油菜黄单胞菌的Ot．淀粉酶基因进行了体外诱变。通过鉴别培养基进行筛选，得到5个具有高酶活的诱变基因，利用生物学软件
DNAstarN出发基因序列进行比较，分析了突变位点和酶功能变化的相应关系。结果显示：基因诱变后酶活的改变主要是由淀粉酶
基因空间结构的改变向引起的，而不是由启动了的变化引起的。
关键词：定向进化：碱基类似物；诱变；a．淀粉酶基凶
中图分类号：Q556 文献标识码：A 文章编号：0254—5071(2010)02—0094_03
Directedevolutioninv／troof by PCR
or-amylasegeneerror-prone
ZHANG
Jianyunl，GULikun”，CHENHongge2
ofResource
andEnvironmentScience,HenanInstitute 451191。China；
(1．College ofEngineering,Zhengzhou
ofLifeScience，Henan
2，College AgriculanalUnivemity,Zhengzhou450002,Ctma)
Abstract：Randomon invitrowasconductedbasedon PCR dn限when
mutagenesisot-amylasegene error-pronestrategy．5-BrdUTPpartlyreplace
fivemutatedwith obtained
selective screened were
replicationstarted．Byusing medium，we geneshigherenzymeactivity．Thesequencesaligned
withthethe the softwareDNAstar．Theresultsshowedthatthe of aftermutationcaused
originalgeneby biological changesenzymeactivity mainly
the ofstructure causedthe ofthe
by changes ofa-amylasegene，notby changespromoter．
words：directed
Key evolution；5-BrdUTP；mutagenesis；a-amylase
CHENK等[91用此策略定向进化枯草杆菌蛋白酶E获催化
d．淀粉酶(alpha-Amylase)为1，4一仪一D一葡萄糖苷水解
酶，作用淀粉时可从分子内部切开Ot一1，4键生成小分子糊精 活性提高256倍的突变体。
和还原糖
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