当归苦参丸2种方法提取液的成分比较.docVIP

当归苦参丸2种方法提取液的成分比较 张兆旺　王英姿　孙秀梅 　　摘要　目的：选择当归苦参丸的提取工艺。方法：以阿魏酸、苦参碱、苦参总碱及干浸膏为指标，采用半仿生提取法(简称SBE法)和水提取法(简称WE法)进行比较研究。结果：4个指标综合评价Y值为：SBE法＞WE法。结论：当归苦参丸改制成其他口服制剂可选用SBE法提取。　　关键词　当归苦参丸　提取法　阿魏酸　苦参碱　苦参总碱　干浸膏 　　当归苦参丸出自《卫生部药品标准》，为对其进行剂改研究，根据SBE法理论［1，2］，在用均匀设计优选出SBE法工艺条件的基础上，本文报道SBE法与WE法的成分对比研究。 1　仪器与材料　　PHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)；MA 110型电子分析天平(上海第二天平仪器厂)；CS-930薄层扫描仪(岛津)。　　药材经作者鉴定，当归为伞形科植物Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根；苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。　　阿魏酸、苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所)。试剂均为分析纯。 2　方法与结果张兆旺　王英姿　孙秀梅2.1.1　WE液　　按处方比例称取药材，混合粉碎，取10～20目粗粉50g，用“双提法”提取3次(提取用水均为pH 7.00，分别加药材重量的10，6，6倍,浸0.5h,提取2.0，0.5，0.5h)。提取液分别抽滤，合并滤液，浓缩定容至100ml，得WE浓缩液(每1ml相当于原药材0.5g)。挥发性物质另器收集保存。　　取WE浓缩液10ml，置蒸发皿中水浴蒸至近干，加硅藻土3g，搅匀，烘干，研细，以乙酸乙酯-甲酸(19∶1)100ml，索氏回流提取2h，提取液水浴蒸干，以甲醇定容至5ml(每1ml相当于原药材1g)，即得WE1供试液。2.1.2　SBE液　　按2.1.1项下方法，只将提取用水依次改为pH　2.00，6.50，9.00，依法制得SBE浓缩液和SBE1供试液。　　另取2种浓缩液各50ml，分别加浓氨水调pH 9.0，置蒸发皿中水浴浓缩至近干，加硅藻土15g，搅匀，烘干，研细，用氯仿100ml索氏回流提取2h，回收氯仿并定容至50ml(每1ml相当于原药材0.5g)，即得WE2供试液和SBE2供试液。2.2　对照液的制备　　精密称取阿魏酸1.70mg，加甲醇定容至2ml；苦参碱1.20mg，加无水乙醇定容至5ml，备用。2.3　阿魏酸的定性鉴别与含量测定2.3.1　阿魏酸的定性鉴别　　取2.1项下WE1与SBE1供试液各5.0μl，2.2.2项下阿魏酸对照液2.0μl，分别点于同一块0.3%CMCNa-硅胶G层板上，用苯-冰醋酸-甲醇(15∶1∶1.5)展开15cm，挥干溶剂，于UV 365nm下观察，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同深蓝色荧光斑点。2.3.2　阿魏酸的含量测定［3］2.3.2.1　吸收曲线与标准曲线的制备　取2.2项下阿魏酸对照液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0μl，分别点在同一块0.3%CMCNa硅胶G薄层板上，按2.3.1项下条件展开，定位，测定吸收曲线，结果在320nm处有最大吸收，而在370nm处吸收较小。故扫描条件为：双波长反射式锯齿扫描，λS 320nm，λR 370nm，SX 3，狭缝1.2mm×1.2mm，灵敏度中。按上述条件扫描测定，以峰面积积分值和阿魏酸点样量进行回归分析，得Y=42661.8867+36559.635X,r=0.9971。以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标作图，得一条不过原点的直线，在1.7～10.2μg线性关系良好，故用外标二点法测定含量。2.3.2.2　稳定性试验　将对照液的同一斑点，依2.3.2.1项下方法，每隔20min扫描1次。结果表明，斑点面积积分值在1h内基本稳定，RSD　1.8%(n=4)。2.3.2.3　精密度试验　将对照液的同一斑点，依2.3.2.1项下方法，连续扫描5次，结果RSD 2.2%。2.3.2.4　供试液的含量测定　取2.1项下WE1和SBE1供试液各10.0μl，阿魏酸对照液5.0，10.0μl，分别点于同一块CMCNa-硅胶G薄层板上，按2.3.2.1项下条件展开，定位，扫描。3次测定结果，SBE液中阿魏酸含量3.215 μg.g-1；WE液中阿魏酸含量2.022μg.g-1。经统计学处理，有显著性差异(P＜ 0.001)。2.4　苦参碱的定性鉴别与含量测定2.4.1　苦参碱的定性鉴别　　取2.1项下WE2和SEB2供试液各10ml，水浴蒸干，残渣用无水乙醇溶解并分别定容至5ml。取该液各30.0μl与苦参碱对照液10.0　μl，分别点于同一块0.3%CMCNa-硅胶G薄层板