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方法比较试验 一. 实验目的 1.掌握本实验的实验原理； 2.掌握两种不同操作方法的操作过程； 3.了解血清葡萄糖测定的临床意义； 4.学会应用分光光度计对各组数据进行统计处理。 二.实验原理 方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法（如参考方法或经典方法）作对比分析,同时测定一批标本计算出两种方法间测定结果的差值，以评价候选方法的准确度，是考核候选方法是否可被采用的重要试验。用于检测候选方法的恒定误差和比例误差，如对适当的数据进行分析也可以提供误差的性质，本实验以邻甲苯胺法作为比较方法，评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差 邻甲苯胺法测定血糖原理： 在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺(O-T)缩合成糖基胺，经脱水，生成希夫碱（Schiff base），经分子重排生成蓝绿色化合物，在630nm波长处有一吸收峰，吸光度大小在一定范围内与血糖浓度成正比。 邻甲苯胺+葡萄糖 葡萄糖基胺 希夫碱 蓝绿色化合物 三.试验试剂器材 1.邻甲苯胺试剂 2.GOD-POD法试剂盒 3.待测血清 四种含血糖浓度不同的血清：2.2mmol/L、6.7mmol/L、5.2mmol/L、3.7mmol/L. 4. 葡萄糖标准液（5.55mmol/L） 5.其它：移液器、可见分光光度计、水浴箱等 四、操作步骤 1．每人随机选择血糖含量高低不同的病人血清标本2份。 2．将每份标本分别用两种方法各测定2次。将标本按某次序排列先测一次，第2次测定时，标本顺序全部倒过来。例如，第1次序号为1、2、3、4、5、6、7、8，第2份序号为8、7、6、5、4、3、2、1。 3．计算出两法各自的测定结果 具体操作如下： GOD-POD法 ； 加入物 空白管 S(标) U1(测) U2(测) DDW 10ul - - - 5mmol/L(糖标) - 10ul - - 待测血清 - - 10ul 10ul 试剂（酶酚） 1.5ml 1.5ml 1.5ml 1.5ml 混匀后置370C水浴15min,于505nm处比色，空白管调零，读取吸光度值。 O-T法 (邻甲苯胺法) ； 加入物 空白管 S(标准管) U 1(测) U2(测) DDW 0.1ml - - - 5mmol/L糖标 - 0.1ml - - 待测血清 - - 0.1ml 0.1ml 邻甲苯胺试剂 3ml 3ml 3ml 3ml 混匀后放入沸水中煮沸5min，取出置冷水中冷却3min，于630nm处比色，以空白管调零，读取吸光度值。 五、结果计算 测定管吸光度 血清葡萄糖= × 5mmol/L 标准管吸光度 【参考范围】 空腹：3.89～6.11mmol/L；餐后2h：＜7.8mmol/L。 数据处理 1．设对比方法测定结果为X值，候选方法测定结果为Y值。若有n个标本，则有2n对X和Y的测定结果。 2．离群点检查：先计算每一标本每一方法成对结果的差值和差值的均值。以4倍的