《基因重组酵母工程菌优化表达人源胶原蛋白》.pdfVIP

第 35卷 第4期 南京理工大学学报 Vo1．35 No．4 2011年8月 JournalofNanjingUniversityofScienceandTechnology Aug．2011 基因重组酵母工程菌优化表达人源胶原蛋白 刘 斌，郭红丽，钮小松，张小霞，杨树林 (南京理工大学 环境与生物工程学院，江苏 南京210094) 摘 要：通过响应曲面法(RSM)优化巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115／pPIC9KG6表达高亲水性 重组人源胶原蛋 白的摇瓶培养条件。采用Box—Behnken设计(BBD)考察初始诱导pH值、温度 和甲醇添加量三个主要影响因子对重组人源胶原蛋 白表达量的影响，利用DX7Trial软件设计 实验方案，根据该方案设置不同培养条件进行实验并测定相关参数。响应面分析确定的最优因 素水平组合为 ：初始诱导 pH值为5．0，诱导温度为28℃，甲醇添加量为2．2％／24h。通过响应 面法优化发酵的内在因素水平，找出最佳条件，为利用其指导在发酵罐中进行高密度发酵生产 人源胶原蛋 白奠定基础。 关键词：巴氏毕赤酵母；重组人源胶原蛋 白；响应曲面法；Box—Behnken设计 中图分类号：Q815 文章编号：1005—9830(2011)04～0558—05 OptimizationofFermentationConditionsofGeneticallyEngineered PichiapastorisExpressingRecombinantHuman—sourceCollagen LIU Bin，GUO Hong—li，NIU Xiao—song，ZHANG Xiao—xia，YANG Shu—lin (SchoolofEnvironmentalandBiologicalEngineering，NUST，Nanjing210094，China) Abstract：Responsesurfacemethodology(RSM)isusedtooptimizethefermentationconditionsofge- neticallyengineeredPichiapastoris(GS115／pPIC9KG6)expressinghighlyhydrophilicrecombinant human—sourcecollagen．Box—Behnkendesign(BBD)isintroducedtoestimatetheimpactofinitialin— ducementpH，temperature and addition amountofmethano1．An experimentisdoneby setting differentcultureconditionsaccordingtotheschemedesignedthroughtheDX7Trial software，andthe correlationalparametersaredetemr ined．TheRSM analysisresultshowsthattheoptimalscaleof factorsis：initial inducementpH 5．0，temperature28℃ ，additionamountofmethanol2．2％／24h． Theexperimentofferspreciseconditionsforhigh densityfemr entationperfomr edinfemr enter． Keywords：Pichiapastoris；recombinanthuman—sourcecollagen；responsesurfacemethodology；Box- Behnkendesign 收稿 日期：2010—09-20 修回日期 ：2011-06—10 基金项目：国家 “863”计划资助项 目(2008AA12A218)；教育部博士点基金(20093219110013) 作者简介：刘斌(1971一)，男，博士生，主要研究方向：基 因工程技术的应用，E—mail