《Agilent气质联用仪软件定量方法图示》.doc

实验室练习6： 数据定量分析 在这个实验中,您将建立具有三个浓度级别的校正数据库,并将其保存为方法的一部分。该方法用于未知物的定量计算。 在这个实验中： 获取所需信息以设置校正方法 建立一个5 个浓度级别的含内标的校正数据库 定量一个未知化合物 对以下化合物进行定量：  内标 目标化合物 Tributyl phosphate Acetamide,N-phenyl phenacetin caffein 积分 精确定量的重要因素之一是正确积分。 通过选择File/LoadDataFile…调用C:\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\ CLWV020.D 文件，选择 Method / Load Method… 调用DEFAULT.M 方法。 选择Chromatogram / Select Integrator 及 RTE Integrator 单击 OK。OK 对积分来说只是临时选择。 现在让我们对 caffein 设定积分参数。 选择 Chromatogram / Extract Ion Chromatograms… 完成图1 所示的需要输入的项目（注意时间范围）单击 OK。 图 1 现在编辑 RTE 的缺省积分参数。选择 Chromatogram / MS Signal Integration Parameters… 完成图 2 所示的要输入的项目。 须知当欲在最小峰面积 (minimum peak area) 中添入大于100 的数之前 必须选中Area Counts 选项框。  图 2 单击 OK 接受所做的改变。 现在 通过选择 Chromatogram / Integrate 用这些参数做 积分。注意离子 194被积分，而离子67没有被积分。让我们降低最小面积来解决这一问题。 选择 Chromatogram / MS Signal Integration Parameters… 完成图 3 中所示的各项内容。 图 3 单击 Save… 和 OK输入积分文件名字 VOLATILE.P，单击 OK。  图 4 在积分参数框中单击OK 返回离子质量色谱。在Chromatogram / Integrate 用降低后的最小峰面积参数做 积分。 注意此时离子67 和194都被积分了。现在我们建立并保存了积分参数，它将被用于定量数据库。 选择 Chromatogram / Draw Chromatogram 查看当前数据文件的 TIC 图。 建立校正曲线： 无论SCAN 和SIM 方式，用提取离子质量色谱做校正和定量比用总离子流色谱峰要好，因为能提高信噪比。用提取离子定量比用TIC 精度更高。TIC 则用于开始设置校正参数时确定保留时间。 选择 Calibrate / Set Up Quantitation...。 Quantitation Database Globals 对话框会显示出来。完成图 5 中所需填入的内容。 图 5 注意标有NOTICE 处用了 RTE 积分参数文件。 完成后单击 OK。Edit Compounds 框（图 6）会显示出来：  图 6 单击 Insert Above，图 7 会显示出来： 图 7 注意:必须首先输入内标。所有在内标之后输入的化合物都用它定量，直到遇到下一个内标。 将7-13 分钟范围内的色谱图放大在窗口中。对准窗口2 中10.7分钟处双击鼠标右键。 在屏幕上会出现什么信息？ _______________________________________________________________ 注意保留时间(箭头在X 轴的位置)被填写在QuantSetup 窗口。同时所指定保留时间的质谱显示在窗口1。  输入化合物名称。填入化合物名称。第二个化合物是 Tributyl phosphate 大约在10.7分钟。注意如果使用氘代内标时区分定量，化合物是靠信号而不是保留时间，因为内标和要定量的化合物共流出，因此峰会重叠。ISTD 选项被选中。 将箭头移到窗口 将箭头放在M / Z93 上同时击鼠标左右键。 会发生什么？ _______________________________________________________________ 用同样方法输入一个或几个特征离子。对于 Tributyl phosphate ，特征离子是 135 。 全部输入之后，在Quant Setup 窗口底部击 Save 键 。 这就完成了需要在定量数据库中添加单个化合物的任务。 重复以上步骤，把表1 中每个化合物输入定量数据库。（注意 Tributyl phosphate 已经输入了。） 化合物名称 内标 近似的保留时间 目标离子 特征离子