宽礁膜(Monostroma+latissium)多糖的分离、结构与抗凝血活性的分析.pdf

宽礁膜（Monostroma latissium）多糖的分离、结构和抗 凝血活性研究 摘 要 宽礁膜（Monostroma latissium）隶属于绿藻门，绿藻纲，礁膜科，礁膜属。 多糖是宽礁膜的有效成分。本文以宽礁膜为原料，对宽礁膜多糖的提取分离、化 学特征、结构和抗凝血活性进行了研究。 论文第一部分，以宽礁膜为原料，依次采用冷水、热水和碱液提取，分别 得到三个多糖组分 CE、HE 和 AE ，运用化学、气相色谱和高效液相色谱等方法 分别对其化学组成进行了分析比较。结果表明：所得多糖总得率为 40.41% ，三 种多糖都为含硫酸根的水溶性多糖，硫酸根含量分别为 21.33% 、24.92% 和 25.34% ，所含单糖主要为鼠李糖，另外还含有少量的葡萄糖和木糖，糖醛酸种类 为葡萄糖醛酸。 论文第二部分，在对各多糖组分基本理化性质分析测定的基础上，以 HE 为 研究对象，通过各种色谱分离纯化出 3 个纯品多糖 HEA 、HEB 和 HEC ，并采用 化学和现代波谱学技术对 HEA 、HEB 和 HEC 的化学组成和结构进行了研究。结 果表明，HEA 分子量较大（725.4kD ）， HEB 和 HEC 分子量相近（54.8 kD 和 68.8 kD ）， 三种多糖的单糖组成相似，其中 HEC 硫酸含量最高；HEA 和 HEB 主要含有 1→3、1→2 连接的鼠李糖， 硫酸基位于 1→2 连接鼠李糖的 C-4 位或 C-3 位上。HEB 主链是由 1,2-Rha 和少量的 1,3-Rha 连接组成的硫酸化鼠李聚糖， 并带有少量分支；HEA 是由各种键型交替相连的结构复杂的一种硫酸化鼠李聚 糖。 论文第三部分，探讨了氧化降解和酸降解方法制备低分子量宽礁膜多糖片段 的工艺，在此基础上采用凝胶色谱等技术，制备获得了不同分子量的多糖片段， 并通过活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间法分析测定不同分子 量的多糖片段的抗凝血活性。结果表明，本文所采用的 H2O2 降解方法对多糖的 基本结构没有影响和破坏，而 H2SO4 降解方法对多糖的基本结构的影响也很小。 通过这两种方法可以有效地制备获得一系列不同分子量的多糖片段。抗凝血活性 研究表明，宽礁膜多糖主要抑制内源性凝血途径和/或共有凝血途径以及抑制凝 血酶活性或纤维蛋白原转化为纤维蛋白，而对外源性凝血途径没有影响。而且， 具有较高分子量的多糖片段具有与母核宽礁膜多糖相似的抗凝血活性，但随着多 糖片段分子量的进一步降低，其抗凝血活性下降。结果揭示，分子量大小对宽礁 膜多糖的抗凝血活性有重要作用，宽礁膜多糖抑制凝血酶的作用要求其糖链具有 一定的长度。 论文第四部分，采用酸降解方法对宽礁膜多糖进行降解，通过凝胶色谱技 术分离得到 7 个寡糖组分，并采用甲基化分析、红外光谱、电喷雾质谱和电喷雾 电离-碰撞诱导解离二级质谱等技术对寡糖的结构进行研究。结果表明，所得寡 糖组分主要由 2-7 糖组成，其主要结构单元为：由 1→3 连接鼠李糖组成的直链 结构，硫酸根的位置位于非还原端，可能在 C-2 或 C-4 位上；葡萄糖醛酸与鼠李 糖组成直链结构，且位于非还原端。 本研究的创新点在于：采用各种色谱分离技术、化学和先进的仪器分析 技术，首次对宽礁膜多糖进行了系统的研究，揭示了宽礁膜多糖的化学特征和结 构。首次利用氧化降解、酸降解方法和凝胶色谱等技术，制备宽礁膜多糖的不同 分子量的多糖片段，并初步揭示了宽礁膜多糖抗凝血活性的作用机制和构效关 系。 多糖是宽礁膜的有效成分，对其开展结构和活性的研究十分重要和必要。本 研究为宽礁膜多糖的研究提供了理论数据，为开发利用宽礁膜奠定了基础，对促 进“海洋糖库”的建设，发展具有我国特色的海洋新药都有重要意义。 关键词：宽礁膜；硫酸化多糖；分离；结构；分子量；抗凝血活性 Studies on Isolation, Structure and Anticoagulant Activity of the Sulfated Polysaccharide from Monostroma latissimum Abstrac