内皮抑素抑制脉络膜新生血管的实验的分析.pdf

中文摘要 内皮抑素抑制脉络膜新生血管的实验研究 摘 要 neovascularization 脉络膜新生血管(choroidal CNV)是由多种病因 所致的脉络膜新生血管芽穿越bruch氏膜并在视网膜色素上皮下和／或上 增殖形成的纤维血管组织，常伴有黄斑部视网膜下的浆液性渗出和出血， 可导致多种眼底疾病(年龄相关性黄斑变性、拟眼组织胞浆菌综合症、 眼底血管样条纹合并黄斑变性、病理性近视黄斑病变、中心性渗出性视 网膜病变等)，是视力丧失的根本原因。以CNV为主要病理特征的年龄 相关性黄斑变性目前已成为国内外老年人群中首要的致盲性眼病。如何 有效的抑制CNV的形成和生长是多年来一直困扰眼科学界的难题。 CNV的确切发病机制尚未阐明，缺乏理想的防治手段。目前抑制 或消退CNV的途径有激光光凝、光动力疗法(PDT)、经瞳孔温热疗法 (rrr)、手术剥除及放射治疗，但治疗效果不尽如人意，或复发率高， 或不可避免损伤正常组织结构，造成视功能进一步恶化。探讨CNV发病 机理，在此基础上寻求一安全、稳定、高效的治疗策略势在必行。 近年随着分子、细胞生物学技术的发展，CNV形成的病理过程逐渐 为人们所认识，建立于CNV分子机制的新生血管形成抑制剂成为研究 热点。目前已报道的治疗实验性CNV的内源、外源性新生血管形成抑制 等因素限制了在临床的进一步应用。内皮抑素是从患血管内皮瘤的小鼠 血清中分离出的迄今最强的内源性血管生成抑制因子，由胶原蛋白XⅧ 的C．末端非胶原区内的184个氨基酸片段构成，能特异性抑制血管内皮 细胞生长，而不影响其他非内皮系统起源的细胞。内皮抑素目前主要应 用于抗肿瘤研究，尚未见作用于CNV深入的研究报道。虽然CNV与肿 瘤血管形成的启动因素以及级联(cascade)反应形式可能不同，但两者 具有相同的结构特征。为此我们将内皮抑索引入CNV治疗，观察其对CNV 的抑制效应：通过将内皮抑素蛋白注射入激光诱导的大鼠脉络膜新生血 中文摘要 管模型，我们观察到：内皮抑素可以有效抑制CNV的形成：但研究中我 们采用的重组内皮抑素蛋白生产纯化工艺复杂，且半衰期短，要保持体 内的有效浓度需要反复注射，增加了眼组织创伤、感染机会，为寻求一种 新的治疗方式，使内皮抑素在体内能够持续产生和释放，我们在体外分 离培养了Brown norway大鼠视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment RPE)，并应用转基因技术体外培养了稳定表达人内皮抑素的 epithelium RPE，从而为脉络膜新生血管的基因治疗奠定基础；在第四部分，我们 内转染，通过一系列观察指标，我们得出，内皮抑素基因可以有效抑制 CNV的形成。 第一部分 重组内皮抑素蛋白抑制脉络膜新生血管的实验研究 目的：观察内皮抑素蛋白抑制激光诱导的大鼠脉络膜新生血管 (ChoroidalNeovascularization CNV)的效果。方法：采用基因重组方法 获得内皮抑素蛋白，取Brown 式建立CNV模型，随机分为内皮抑素组，生理盐水组，对照组，各组10 ul视网膜下注射， 只，分别给以内皮抑索20ul(5ug／u1)，生理盐水20 对照组光凝后不做处理，观察期为14天。观察指标为激光共聚焦脉络膜 血管平铺方法测量各组CNV面积，根据FFA荧光渗漏程度对各光凝斑 评分，以及光镜、CDl05及factorVIII免疫组化等组织病理学观察。结 果：内皮抑素组CNV面积小于生理盐水组及对照组(F=307．351； P--0．001)；各光凝斑荧光渗漏程度评分结果，内皮抑素与生理盐水组、 凝后14天，生理盐水组和对照组光凝区脉络膜层增厚，脉络膜毛细血管 层内皮细胞大量增殖，大量新生血管增生，内皮抑素组内皮细胞增生数