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基因芯片原位合新材料和结果分析新方法研究
摘 要
近年来,借助固相原位合成技术或探针固定化技术制备微型基因芯片进行DNA杂交分
析引起了人们的广泛兴趣。目前用作DNA微阵列原位合成的基片材料多为玻璃片和硅片等,
而聚丙烯膜、尼龙膜等微孔膜大多用于点样法生物芯片的制备。但玻璃具有不易加工成特殊
形状的缺点,而膜又有强的荧光背景。我们首先采用等离子体接枝技术对几种常见的有机聚
合物材料进行了表面功能化改性。以探索新的易加工和更加实用的寡核苷酸原位合成基片材
料。此外,还初步探索了时间分辨荧光方法在生物芯片杂交结果分析中的应用。
r一、H2和N2混合气体等离子体处理聚丙烯微孔膜,采用扫描电镜观察了处理前后膜的
一、、3
形貌变化:真空全反射红外光谱、x一射线光电子能谱和紫外光谱证实在其表面接技了大量活
性氨基:用紫外光谱定量计算得知,所接枝的氨基密度为0.59
I.tmol/cm2,远高于功能化玻璃
上的氨基密度。该改性膜适合于DNA的原位合成,并可得到98%以上的偶联效率,是一种
新型的DNA原位合成基材。
二、以正交试验法优化聚四氟乙烯等离子体处理条件,并对最佳条件下处理的聚四氟乙
烯用x.射线光电子能谱和紫外光谱进行了表征确认。同时,在改性后的聚四氟乙烯上合成了
寡核苷酸探针,利用其与荧光标记的靶序列杂交,分析了正配与错配序列在荧光强度上的区
别。结果表明聚四氟乙烯是~类比聚丙烯微孔膜更理想的DNA原位合成基材。
红外光谱、核磁共振谱和元素分析进行了表征;而且通过条件优化,总产率达到了89.4%,
比文献值提高了17.3%。同时,我们对BCPDA-Eu”进行了荧光分析和时间分辨荧光测定。
结果显示在lO12~10‘8mol/L浓度范围内,螯舍物的时间分辨荧光强度与浓度具有线性关系
从而可对联有BCPDA的靶序列进行定性和定量分析Ⅳ
关键词:等离子体,氨基,聚丙烯微孔膜,聚四氟乙烯,时间分辨荧光,BCPDA
鼍瞄f乜
Abstract
Abstract
Inrecent hasbeenconsiderableinterestin DNA
years,there developinghighlyparallel
onminiaturizedflat
substrates series
ofdifferent
hybridization or“chips”-a
assays oligonucleotide
areimmobilizedonsubstratesmeansofsolid and
sequences by synthesis
phase加situ probe
immobilization situ
substratesofin arc
techniques.Atpresent.the synthesis
ofmicroarrayusually
slidesandsilicon of
glass wafers.Becausetheir fluoresc
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