NaCl胁迫对滨海植物肾叶打碗花种子萌发的影响.docVIP

NaCl胁迫对滨海植物肾叶打碗花种子萌发的影响 引言 目前，滨海沙地的植物逐渐由于种种原因比如旅游开发，人为开采等原因极大减少，使海滨的防风固沙能力减弱。因此海滨沙地植物应该逐渐受人类重视。关于NaCl胁迫的研究的报道比较深入，叶梅荣等研究了NaCl对吸胀后小麦种子发芽的影响[ 1],陈火英等研究了NaCl胁迫对不同品种番茄种子发芽特性的影响等[ 3], 叶武威等探讨了NaCl和食用盐对棉花种子萌发的影响[ 2]，均得出高浓度的盐胁迫对种子萌发有显著的抑制作用。但是，这些主要针对的是农作物进行的耐盐性研究，对于滨海沙地的植物种子发芽的耐盐性研究的较少，本实验是研究不同NaCl浓度对肾叶打碗花种子萌发的影响，选择一些饱满的种子，用不同浓度的盐溶液对种子进行处理，观察肾叶打碗花种子的萌发情况，并用已处理的种子进行接下来的生理生化指标的测量。在胁迫下，对种子进行分析，探讨种子在不同盐分浓度下的耐盐性( MDA) 含量测定用硫代巴比妥酸(TBA) 方法测定参照现代植物生理学实验指南(1999)的方法[8]。取0.2肾叶打碗花种子幼苗用液氮研磨后，加入10%三氯乙酸(TCA)6ml提取，于4000r/min离心10min，吸取离心的上清夜2ml(对照加 2ml蒸馏水)，加入2ml0.6%硫代巴比妥酸(TBA，用10%TCA配制)溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。测定OD450、OD532和OD600值，根据双组分分光度计法计算MDA含量。用下列公式计算MDA浓度，C2为MDA浓度，C2(μmol/L)=6.45(D532一D600)一0.56D450。再根据叶片重量计算出MDA含量，单位以μmolg-1FW表示。 2.1.3.3 肾叶打碗花种子脯氨酸（Pro）含量测定 各个处理的种子在处理第7天后测量脯氨酸的含量。重复三次。脯氨酸的含量测定采用酸性茚三酮法参照现代植物生理学实验指南(1999)的方法[8]，在建立脯氨酸含量的标准曲线后，测定盐胁迫下幼苗中脯氨酸的含量。称取0.2g幼苗用液氮研磨，加入5ml3%磺基水杨酸提取。于沸水浴中浸提 10min，冷却后，3000r/min4℃离心10min，取上清液2ml，加入2ml3%水杨酸，再加入2ml冰乙酸和 4ml2.5%酸性茚三酮，然后置于沸水于中显色 60min。冷却后，加入4ml甲苯萃取红色物质。静置后，取甲苯相测定OD520值，对照标准曲线查出脯氨酸含量。在0.6一20μg/ml脯氨酸浓度范围为制作标准曲线，取标准液各2ml，显色、萃取、比色程序同上。脯氨酸含量用μg/g ?FW表示。 2.1.3.4 肾叶打碗花种子抗氧化酶含量测定 各个处理的种子在处理第7天后测量抗氧化酶SOD、POD、和CAT的含量。 SOD 活性测定采用氮蓝四唑( NBT) 法[8]，取0.2g幼苗用液氮研磨后加入5ml50mmol PH7.8磷酸缓冲液提取，于12000r/min4℃离心20min。在盛有3ml反应混合液(在54ml l4.5mmol/L的甲硫氨酸中分别加入均以50mmol/LpH7.8磷酸缓冲液配制的3μmol/LEDTA，2.25mmol/LNBT和60μmol/L核黄素各2ml)的试管中，加入0.05ml酶液混匀后放在透明试管架上，在光照强度为40μmol m-2 s-1培养箱内25℃下照光8min，取出试管迅速测定OD560值，以不加酶液的照光管为对照。用下列公式计算酶的活性:酶单位群品量=反应被抑制(50%)×3ml反应混合液中加入的样品量。酶活性用U/g·FW表示。 POD 活性采用愈创木酚法测定[8], 酶液制备同SOD酶，取适量酶液(磷酸缓冲液做空白对照)加入3ml反应混合液 (l00mmol/LpH7.0磷酸缓冲液，20mmol/L愈创木酚);混匀后于25℃保温5min，加入20μlH202启动反应，测定OD470值。酶活性以U/g ? Fw表示。 CAT 活性采用紫外分光光度比色法[8]，按照上述的实验操作提取酶液，但在研磨过程中需要加入少量石英砂和氯化钙。取样品测定管和对照管，分别在每支试管中加入PH=7.0的磷酸缓冲液 1.0ml，蒸馏水1.7ml，酶提取液 0.1ml，其中对照管的酶液要煮死。将上述管于25℃水浴中预热3min后，逐管加入0.2ml 0.2mol／L过氧化氢溶液，加完后即可放入比色皿中在240nm下测量OD值。酶活性以U/g ?min?Fw表示。每个指标均重复3 次。 2.1.4数据处理 所有的数据用Microsoft Excel 2003输入和作图,并用SPSS 17.0软件对数据用One-way ANOVA单因素方差进行分析,同时采用Duncan法对平均值进行多重比较。所有的数据均为三次实验的平均值±标准差，并在0.05水平