两种书虱体内共生菌16S rRNA基因序列测定与分析.pdfVIP

1 两种书虱体内共生菌 16S rRNA基因序列测定与分析 王梓英，王进军* 西南大学 植物保护学院, 昆虫学及害虫控制工程重点实验室，重庆 400715 E-mail ：jjwang7008@ 摘 要：采用特异性引物 PCR 扩增、克隆和测序获得嗜卷书虱和无色书虱共 5 个地理种群体 内共生菌 16S rRNA 基因序列。通过同源关系分析证实三个嗜卷书虱地理种群体内的共生菌 同源性较高，达99%以上。而两个无色书虱地理种群体内的共生菌同源性较低，仅 76 ﹪。 研究结果为研究书虱不同地理种群的遗传分化是否与共生菌协同进化提供了基础数据。 关键词：书虱，共生微生物，16S rRNA, 基因序列 1. 引 言 昆虫与微生物的共生是一种普遍存在的现象，目前已知与昆虫共生的微生物可大致分为 三大类：细菌、酵母和立克次氏体。细菌和类细菌多存在于蜚蠊目、等翅目、半翅目、虱目、 食毛目、鞘翅目和双翅目等昆虫体内；放线菌生活在吸血蝽体内；鞭毛虫和酵母菌常存在于 蜚蠊和白蚁体内[1]，飞虱、蚜虫、烟草甲和药材甲等同翅目和鞘翅目昆虫体内存在多种类酵 母菌[2-4] ；沃尔巴克氏体(Wolbachia)是节肢动物体内发现的一种立克次氏体细菌，研究表明， 大约有 16％的昆虫感染了这种细菌。有学者指出自然界的感染率远远超过了这个数字，其 是迄今为止已知的最为广泛存在的胞内共生菌之一，国内报道的最多的是在蚊虫[5-6] 、果蝇[7] 和飞虱[8-9] 中发现这种立克次氏体细菌，虱啮属昆虫三色书虱体内也发现了有此细菌共生[10] 。 虱啮属 (Liposcelis) 昆虫隶属于啮目(Psocoptera)、粉啮亚目(Troctomorpha)、虱啮科 (Liposcelididae)、虱啮亚科(Liposcelidinae) [11] 。啮目昆虫为昆虫纲中的一个小目，其体小， 生境特殊，种类多，分布广泛，食性特殊，多数以苔藓、真菌的孢子为食，少数为仓储和书 籍等的害虫和捕食蚜、蚧等害虫的天敌昆虫。而为害储粮和书籍的啮目昆虫多隶属于虱啮属。 有些种类如嗜卷书虱(L. bostrych ophila)等更是储粮害虫中的优势种群[12] 。因此虱啮属昆虫是 整个啮目昆虫中经济意义最重要的一个类群。 本研究利用特异性引物PCR扩增、克隆和测序获得虱啮属昆虫体内共生菌16S rRNA基 因序列，分析其种系关系，为进一步探讨其传播方式及其与宿主的相互作用奠定基础。 2. 材料与方法 2.1 试虫 本研究所用书虱采集地见表1，试虫在实验室27±0.5℃、75%~80%RH 、不予光照的条件 下以全麦粉、酵母粉和脱脂奶粉（10 ∶1 ∶1）混合而成的饲料饲养并纯化种群。 1 教育部博士点基金 （20040625006 ）、教育部新世纪优秀人才支持计划 （NCET-04-0854 ）及国家自然科学 基金）资助项目 * 通讯作者 023 E-mail ：jjwang7008@ 。 - 1 - 表1 试虫及其采集地 Table 1 Lipocelis species and collecting localities 种名 采集地 编号 Species collecting localities code 重庆北碚 1 嗜卷书虱