人IFNg体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的应用.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, September 25; 24(9): 1653-1657 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 人IFN-γ体外释放检测法的建立及其在结核病诊断中的 应用 1,2 1,2 3 1,2 3 4 3 4 4 陈颖钰 , 邓铨涛 , 詹枝华 , 郭爱珍 , 项杰 , 陈军 , 周金海 , 曾庆志 , 杜义祥 , 5 5 1,2 1,2 1,2 魏武 , 童庆伟 , 晁彦杰 , 匡有吉 , 陈焕春 1 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室, 武汉 430070 2 华中农业大学动物医学院预防兽医学省重点实验室, 武汉 430070 3 武汉市结核病医院, 武汉 430083 4 武汉市结核病防治所, 武汉 430030 5 华中农业大学校医院, 武汉 430070 摘 要: 本研究旨在建立人IFN-γ体外释放检测法, 用于人结核病的特异性诊断。克隆表达了人IFN-γ基因, 利用纯化的 重组 IFN-γ免疫小鼠, 获得两株高效价的单克隆抗体。用所获得的单克隆抗体及兔抗 IFN-γ 多克隆抗体建立了检测人 IFN-γ 的夹心ELISA, 检测灵敏度达到 31.25 pg/mL 。采集 111 位结核病阳性病人与292 位临床健康对照者肝素抗凝全血, 利用结核菌特异性抗原ESAT-6/CFP-10 融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ, 用所建立的夹心ELISA 及商品化 试剂盒平行检测所有样本, 结果表明两种方法的检测结果相符。结核患者的检测灵敏度为95.5%, 健康对照的阳性检出 率为 16.7%, 患者与健康对照的阳性检出率差异极显著(P0.01), 证实所建立的方法灵敏度与特异性均很高, 具有良好 的应用前景。 关键词: 结核病, IFN-γ , 诊断, ELISA, ESAT-6/CFP-10, 单克隆抗体 Establishment of Human IFN-γ in vitro Release Assay and Its Application in Tuberculosis Diagnosis 1,2 1,2 3 1,2 3 4 3 Yingyu Chen , Quantao Deng , Zhihua Zhan , Aizhen Guo , Jie Xiang , Jun Chen , Jinh