体外生产胚胎技术.pdfVIP

维普资讯 中 国 生 物 工 程 杂 志 第 23卷第 12期 CHINABIOrECHNOLOGY 2003年 12月 体外生产胚胎技术* 李 勇 窦忠英 杨春荣 马霄飞 (西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究 中心 陕西 杨凌 712100) 摘要 体外生产胚胎技 术是胚胎工程技术的基础 ，其过程 涉及到 卵母 细胞 的体外成 熟、精 子获能和 体 外受精 、胚胎的体 外培养这三个方面。主要综述 了卵母细胞体 外成熟的影 响因素 、精子分离和获 能的方法、早期胚胎体 外培养的发 育 “阻滞”现 象和体外培养体 系，同时展望 了该技术的发展前景。 关键词 体 外成熟 体 外受精 胚胎培养 卵母细胞 、受精 卵和胚胎 ，已成为 当前牛胚胎工 1．2 卵母细胞的回收 程一个必要 的部分 。近年来 ，国内外有关体外受精 用带有 12号针头的 10rnl注射器抽取含有卵母 技术与实 际应用于动物生产方面的研 究和报道很 细胞的卵泡液然后检出其 中的卵母细胞 已成为 目前 多。但立足于一门基础学科来看 ，胚胎 的体外生产 回收卵母细胞常用 的方法 。但用切割法切破 卵泡 ， 仍是一个有趣 的研究领域。它使我们对繁殖这一基 每个卵巢可获得较多数量的能用于体外成熟 的卵母 本过程有一个更好 的了解 ，因为体 内过程对 于试验 细胞 。将检 出质量较好 的卵母细胞放在成熟液 中培 研究来讲有一定 困难 。在体 外 ，从未成熟 的卵母细 养 。根据显微镜下卵丘卵母细胞复合体 (COCs)的形 胞到可移植 的牛胚胎这 一过程 涉及 3个 主要方面 ： 态可将卵母细胞分为三级 ：A级 ，有 3层 以上致密 的 (1)卵母细胞 的体 外成熟 ；(2)精子 的获 能和体 外受 卵丘细胞 ，胞 质均匀凝 暗；B级 ，卵丘 细胞在 3层 以 精 ；(3)胚胎的体外培养。 下或部分脱落 、但胞质均匀 ；C级 ，卵丘细胞层很少 、 松散或全部脱落 、胞质无凝块或无颗粒状 。A级和 1 卵母细胞体外成熟 B级卵母细胞可用于体外成熟培养。 哺乳动物 卵母细胞从离体 卵巢 卵泡 中采集后 ， 1．3 影响卵母细胞体 外成熟的因素 于培养液 中进行体外成熟培养时 ，体外成熟牛卵母 卵母细胞成熟涉及细胞核和细胞质事件 ，即包 细胞发育能力 明显低于体 内成熟 的卵母细胞 ，虽然 括细胞 核 、细胞 质和 质膜 的成 熟变 化。Pincus和 其核成熟率 比较相近 。。因此 ，通过完善成熟液可 Enzmann(1935)首次认识到卵母细胞由卵巢 中分离 出 以提高卵母细胞的发育能力和胞质成熟的质量来进 来培养于不添加激素的有血清培养液 中可 自发的发 一 步提高受精后的胚胎发育率和胚胎的质量 。 育到成熟。在牛上 ，首次尝试从屠宰场 卵巢获取大 1．1 卵巢 的储 备 量卵母细胞 并进 行体 外成熟和受精 的人是 Sreenan 一 般研究所用 的卵巢在当地屠宰场采取后尽可 (1968)。随后研究者证实 了当卵母细胞从卵泡液 中 能快 的运 回实验室。运输条件是温度保持在 20～ 分离出来以后会很容 易地发 育到核成熟 ，但它们受 37℃，2～6h内运 回实验 室，运输液为生理盐水或 精潜力却是有 限的。在这样条件下成熟 的卵母细胞 Dulbecco’s磷酸盐缓冲液。Yang等 (1990)研究结果 在精子传入后不能形成正常 的生殖核 ，或随后将受