分子实验 SSR实验操作流程.pdfVIP

SSR 实验操作流程 一、试剂配制 0.2%亲水binding silence （现配现用） 1500μL95%乙醇，7.5μL 冰醋酸，再加入3μLbinding silence，混匀后使用。 注：硅烷可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。特别易燃，要远离热、火花和 明火。其挥发的气雾对粘膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有刺激作用。戴合适的 手套和安全眼镜、始终在化学通风橱里使用。 0.5%疏水repel silence （购买后可直接使用） TBE 母液（5×TBE） Tris Base 54g 硼酸 27.5g EDTA(0.5M pH8.0) 20ml 搅拌溶化，定容至1000ml，无需灭菌，室温保存，母液的pH 值应保持在8.3 左 右。 Urea －TBE(一块胶板用量)： 5×TBE 12ml 尿素 27g 加双蒸水溶解后定容至51ml，使用漏斗过滤。 注：不需现配现用，但需要至少使用的提前一天配制。尿素可因吸入、咽下或皮 肤吸收而损害健康，戴合适的手套和安全眼镜。 40 ％丙烯酰胺 丙烯酰胺 380g 甲叉双丙烯酰胺 20g 加热至37℃使之溶解，加水定容至1000ml，用醋酸纤维素滤膜（入Nalge 滤器， 0.45μm 孔径）过滤，棕色瓶避光保存于室温。 注：丙烯酰胺（未聚合的）是一种强的神经毒素并可通过皮肤吸收（其效应是累 加的）。当称量粉末状丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺时，要佩戴合适的手套和防 护面具，在通风橱内操作。人们多数认为多聚丙烯酰胺是无毒的，但亦应小心操 作，因为可能含有少量未聚合的丙烯酰胺。 10％APS （过硫酸铵） 超纯过硫酸铵 2g 超纯水 18ml 溶解后，4 ℃保存。 注：过硫酸铵对粘膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大的危害性，吸入和致命。 操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱内操作，操作完后彻底 洗手。 TEMED （购买后可直接使用） 电泳级的TEMED 可购自Bio-Rad ，Sigma 或其他供应商。 注：TEMED 对粘膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大的危害性，吸入和致命。 长时间接触可引起严重的刺激或灼伤，操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。 始终在通风橱内操作，操作完成后彻底洗手。TEMED 挥发的气体能传到相当远 的火源并引起花光四闪。切勿靠近热、火花和明火。 Loading buffer： 去离子甲酰胺 50ml 0.5MEDTA(pH8.0) 1ml 二甲苯腈蓝cyanol 0.125g 溴酚蓝 0.125g 混匀后置于4 ℃保存。 注：购买蒸馏的去离子化甲酰胺，分装成小份充氮贮存于-20 ℃，或购买去离子 化试剂级的甲酰胺。许多批号的试剂级甲酰胺已足够的纯，无须进一步处理即可 使用。但是，如果呈现黄色，则必须进行去离子化处理。处理方法见《分子克隆 实验指南》p1587 。甲酰胺是一种致畸剂，其挥发的气雾对粘膜、上呼吸道组织、 眼睛和皮肤有刺激作用。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套 和安全眼镜。当用浓的甲酰胺工作时，要始终在化学通风橱内进行，工作液尽可 能的遮盖。 固定液： 无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml 。配制成终浓度为10％ 乙醇，0.5% 冰 醋酸的固定液。 染色溶液(ACS 试剂)： 无水乙醇50ml，冰醋酸2.5ml，水447.5ml，AgNO3 1g。配制成终浓度为10％ 乙 醇，0.5% 冰醋酸，0.2% AgNO3 的染色液。 注：AgNO3 是一种很强的氧化剂，要谨慎操作。它可因吸入、咽下或皮肤吸收 而损害健康，避免接触皮肤、戴合适的手套和安全眼镜。与其他物质接触可引起 爆炸。 显影溶液： 15g NaOH，0.5ml 甲醛，水500ml。终浓度为3 ％NaOH ，0.1% 甲醛。 注：甲醛有很大的毒性并挥发，也是一种致癌剂。很容易通过皮肤吸收，对粘膜 和上呼吸道组织、眼镜和皮肤有刺激损伤作用。避免吸入其挥发的气雾。戴合适 的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱内使用