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大鼠尿液中唑吡坦及其代谢物分析 LCMS-IT-TOF 概述 近年来，在法医毒物分析工作中涉及唑吡坦的案件成日益上升趋势，常见的案件如麻醉 抢劫等。国内有较多关于人体内唑吡坦含量测定的报道，主要为药代动力学方面的研究，且 多使用 GCMS 法和 HPLC 法,未见对唑吡坦代谢物使用 LCMS 进行系统分析的研究。使用 LCMS-IT-TOF 系统对唑吡坦进行多级质谱研究、总结其多级裂解规律，并在此研究基础上对 唑吡坦在大鼠体内的代谢物进行分析鉴定。 检材处理 尿液处理：酸性提取 取 25 mL 大鼠尿液于锥形瓶中，用 0.1 mol/L 盐酸调 pH 6 ，加入 pH 4.8 醋酸钠-醋酸缓冲液 5 mL，加入 0.5 mL β-葡萄糖醛酸酶溶液，57 ℃下酶解 30 min，离心 （7000 r/min，10 min），上清液过 Oasis® HLB3cc 固相萃取小柱（固相柱使用前依次过甲醇 3 mL 、超纯水 3 mL、pH 4.8 缓冲液 3 mL，进行活化），用 5 % 甲醇水溶液3 mL 清洗柱子，离 心（5000 r/min，5 min ），除去柱中水分，分别用 5 mL 乙醚、3mL 氯仿：异丙醇（9 ：1，V/V ） 洗脱。碱性提取 将酸性提取后的尿液用 6 mol/L NaOH 将溶液调节到弱碱性，加 pH 9.2 的 Tris-HCl 缓冲液 10 mL，过 Oasis® HLB3cc 固相萃取小柱，分别用 5 mL 乙醚、3 mL 氯仿异 丙醇（9:1 ）洗脱。合并洗脱液于具塞玻璃试管中，70 ℃下氮气吹干，残渣用 100 μL 丙酮溶解。 药品与试剂 乙腈为色谱纯（美国 Fisher 公司），甲酸铵为分析纯( 日本和光纯药公司) ，流动相用水由 Mili-Q 纯水系统(美国 Milipore 公司)制得。 仪器及试剂 LCMS-IT-TOF 系统，包括 LC-20AD ×２(输液泵) ，SIL-20AC ( 自动进样器) ，CTO-20AC(柱 温箱) ，SPD-M20A(二极管阵列检测器) ，CBM-20A( 控制器) ，DGU-20A3( 在线脱气机) ， LCMS-IT-TOF( 电喷雾电离－离子阱－飞行时间串级质谱仪) 。LCMSsolution3.5 工作站， MetIDsolution 代谢物鉴定软件。 HPLC ：色谱柱：Shim-Pack VP-ODS 150mm ×2.0mm, 5um 流动相：A 水+25nmol 乙酸铵 B 乙腈 时间程序： 表 1 梯度洗脱程序 时间(min) A( ％) B( ％) 0 90 10 20 70 30 30 40 60 30.1 90 10 45 90 10 45 STOP 流速： 0.2mL/min 进样量：1μL PDA 检测波长： 190-800nm 柱温： 30 ℃ 83 MS ：离子化模式：ESI 源 分析模式：正、负离子模式 雾化气流速：1.50L/min CDL 温度： 200 ℃ 加热模块温度：200 ℃