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实验二 水生生物急性毒性实验---原生动物毒性试验 一、实验目的 (1)通过分析原生动物的数量变化，评价有毒有害污染物对原生动物的影响。 (2) 观察毒物对原生动物的LC50。 二、实验原理 原生动物是一类个体小，结构典型,结构简单的单细胞动物。具有繁殖快,观察方便,容易采集培养等特点, 它们在环境中能充分地与周围的有毒物质相接触；利用原生动物作为毒性试验动物能更好地反映毒物的毒性强度。在适宜条件下，原生动物一天可繁殖数代，除可用于一般毒性试验外，更适于进行毒物对种群繁殖抑制的试验。可作为环境监测良好受试生物之一。 三、实验设备及试剂仪器 (1)生物显微镜1台、LRH 250光照培养箱、微样移液器 (2)小试管（5ml或10ml)、烧杯1个、1mL、2mL刻度吸管各1支、凹玻片1盒、洗耳球1个、长滴管若干。 (3)硫酸铜溶液(10mg/L) (4)草履虫、栉毛虫 四、实验操作步骤 1、实验材料培养与分离 ①实验用尾草履虫采自人工湖, 用稻草液培养分离所得。稻草培养液: 称5g干稻草, 加入10颗麦粒，加入1000ml蒸馏水, 煮沸10 m in , 过滤后滤液中，冷却后曝气后接种草履虫；置于25 ±1℃ 生化培养箱中培养1周 ②分离：将处于对数生长期的草履虫低速离心(1000～1500r/min ) 5～7min后,弃上清,然后用水重复离心清洗2次，再向离心管内加入水,供实验用。 ③以移液枪或毛细滴管吸取极少量培养液于载玻片上，挑取10只草履虫备用。准备18份。 2.预备实验 通过逼近试验确定全致死和无死亡效应浓度范围（注?） 平行 3.正式实验---半数致死浓度试验 （1）Cu2+的质量浓度按下表设5个处理组和1个空白组,每一质量浓度设2个平行组和1个空白对照组。 （2）试验容器采用同一规格普通试管或离心管。用移液管移取1.0ml或2.0 ml上述相应Cu2+浓度的试液,并将前述挑选在载玻片上的10个草履虫冲入试管内。空白对照方法与之相同。 置于25 ±1℃ 生化培养箱中培养。0.5～2h 后取出；分数次镜检，记录每个试管中草履虫的存活数，并推算其死亡率。 组别 1 2 3 4 5 空白 Cu2+ (mg/L) 0.15 0.30 0.45 0.60 0.75 0.0 平行组1 平行组2 注：检查虫体的方法是用吸管，由上层逐渐往下，分 2 ~ 3 次吸尽（不要上下搅匀），吸出的试验液移到凹玻片，在双筒解剖镜下检查。活的生物在上层游动，先被吸出，失去游泳能力或已死亡的个体则沉在管底，最后被吸出，这对计数非常有利。死细胞完全不动，易辩认。 五、结果与分析及实验数据整理 1.急性毒性最大无致死效应和最小全致死浓度的确定 最大无致死浓度(最小致死剂量)是指在一群生物中仅引起个别生物死亡的最低剂量,低于此剂量时就不能使机体出现死亡。 最小全致死浓度(绝对致死剂量)是指引起试验生物全部死亡的最低剂量。 2.急性毒性半数致死浓度的确定 六、思考题 1．原生动物毒性试验要注意的问题是什么?