急性单核细胞白血病THP-1细胞系白血病干细胞的分选、鉴定及其靶向治疗的初步的研究.pdf

中文摘要 急性单核细胞白血病THP．1细胞系白血病干细胞的分选、鉴定 及靶向治疗的初步研究 中文摘要 博士研究生王颖超 导 师盛光耀教授 郑州大学第一附属医院儿科 河南 郑州450052 白血病(1eukemia)是以骨髓和／或外周血中幼稚细胞增多为特征的血液系 stem 统恶性克隆性疾病，白血病干细胞(1eukemiacell，LSCs)在白血病发生、 发展、耐药和复发等方面起重要作用。只有靶向消灭白血病干细胞，才能彻底 治愈白血病。因此，识别和清除白血病患者体内的白血病干细胞，对了解白血 病成因及治疗具有重要意义。 流式细胞仪细胞技术具有精确度高，速度快等特点，是研究白血病细胞中 干细胞分选、LSCs生物学特性的强有力工具。THP．1细胞株是从一个急性髓细 leukemia，AML)男性患儿的周围血培育出的，为儿 胞白血病(acutemyeloid 童AML的实验和临床前期研究提供了很好的模板。阿糖胞苷(Ara．C)是白血 病临床治疗常用药物，主要通过抑制细胞DNA的合成，干扰S增殖期细胞的 增殖，而对处于静止期(G0期)的LSCs无效。所以，迫切需要新的治疗策略， 以提高白血病的不良预后。 本课题旨在探讨急性单核细胞白血病THP．1细胞系中LSCs比例及生物学 LSCs与非LSCs致瘤能 特性，并建立人THP．1白血病小鼠模型，探讨THP．1 力的差别，研究CD47在白血病中的表达特点，为LSCs清除寻找靶点。同时探 讨抗CD47单克隆抗体单独或联合阿糖胞苷作用时的抗白血病效应，以寻找白 T 中文摘要 血病靶向治疗新策略。 第一部分急性单核细胞白血病细胞系THP．1白血病干细 胞的检测、分选及鉴定 目的： 探讨人急性单核细胞白血病THP．1细胞株中是否存在白血病干细胞 情况、耐药性及耐药蛋白、凋亡基因表达差异，从而进一步鉴定LSCs细胞， 了解其生物学活性及特性。 方法： 应用流式细胞术(FCM)N定THP．1细胞株中干细胞在对数生长期THP．1细 胞中的比例，然后分选THP．1白血病干细胞，FCM分析该LSCs亚群与非LSCs 亚群细胞周期。细胞生长曲线法和集落培养法比较LSCs亚群与非LSCs亚群细 胞的增殖能力和集落形成能力。MTT法检测两亚群细胞对阿糖胞苷(Ara—C)敏感 性。 因在两亚群细胞中表达差异。 结果： O．12 4-0．06％；收集分选后LSCs管细胞再次上流式细胞仪进行LSCs细胞纯度 检测示：细胞集中于之前的LSCs区域，比例高达97．0±1．7％。 2．收集分选后的THP．1LSCs和非LSCs，流式细胞仪检测两群细胞各样本的 细胞周期，可见在分选后的LSCs亚群中大部分的细胞处于静止期，C4Gl期比 例达94．03±1．61％，明显高于非LSCs比例，差异有统计学意义；非LSCs 亚群增殖期细胞比例相对较高，分别为S／G2／M期细胞比例为56．584-1．59％。 3．LSCs和非LSCs细胞的生长曲线不同。在接种后的第1和2天，二者无明显 差异，从第3天起LSCs细胞大量增加，快速增殖至指数生长期；非LSCs细胞 生长、增殖缓慢，在第5天进到平台期。LSCs和非LSCs生长速度差异显著(P II 中文摘要 个集落细胞数量高于非LSCs组。 LSCs细胞，24小时对THP．1 uM 149uM，48小时对THP．ILSCs的IC50值为198uM，非LSCs的IC50值为138 (P=0．042)。