实验一 还原性糖脂肪蛋白质的鉴定.pptVIP

实验一 可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 一、实验原理 可溶性还原糖 ＋ 二、几种重要的试剂 斐林试剂 四、实验方法与步骤 2、脂肪的鉴定 五、注意事项 * * 蛋白质 ＋ 脂肪 ＋ 斐林试剂 双缩脲试剂 砖红色沉淀 苏丹Ⅲ染液 苏丹Ⅳ染液 橘黄色 红色 紫色 颜色反应 甲液（0.1g/mL的NaOH溶液） 乙液（ 0.05g/mL的CuSO4溶液） 现配现用 混合均匀 双缩脲 试剂 A液（0.1g/mL的NaOH溶液） B液（ 0.01g/mL的CuSO4溶液） 现配现用 先加A液 再加B液 苏丹Ⅲ（ Ⅳ）染液：用来鉴定脂肪的存在 1、可溶性还原糖的鉴定 (1)制备组织样液：苹果洗净、去皮、切块→取5g加少许石英砂研磨→加5mL水再研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液 (2)鉴定样液：取2mL样液于试管中→注入 2mL刚配制的斐林试剂，振荡混合（淡蓝色）→ 水浴煮沸2min左右，观察溶液颜色变化（先变为棕色，再变为砖红色） 制备生物组织样液 取材、研磨、过滤 取样 取2ml组织样液注入试管注入试管中 注入试剂 向试管中注入2 ml刚配制的斐林试剂 加热和观察 (将4—5滴乙液滴入2ml甲液中) (1)切片制作 (2)染色：在花生子叶切片上滴2～3滴苏丹Ⅲ染液→2～3min中后，吸去染液→ 滴体积分数为50％的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精，再滴1～2滴蒸馏水，盖上盖玻片 (3)镜检鉴定：在低倍物镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处，移至视野中央→转动转换器，换用高倍物镜观察（脂肪滴:橘黄色的圆形小颗粒） 制备实验材料 去种皮、削平面、切片 染色 滴2—3滴苏丹Ⅲ染液染色2—3分钟 去浮色 在玻片上滴1—2滴体积分数为50%酒精溶液，洗去浮色 制作临时装片 放在显微镜下观察（先低倍后高倍） 2、蛋白质的鉴定 (1)制备组织样液：浸泡黄豆1～2d→去皮、切成薄片，加少许石英砂及5mL水研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释10倍以上，否则实验后黏住试管壁不易洗净） (2)鉴定样液：取2mL样液于试管Ⅰ中→加入 2mL双缩脲试剂A液摇匀（造成一个碱性环境）→ 加入双缩脲试剂B液3～4滴，摇匀，注意颜色变化（溶液变为紫色）。另取 清水于试管Ⅱ中→加入 摇匀→ 颜色变化，作为 。 2mL （A液、B液） 无 对照 制备生物组织样液 取材研磨过滤或制备蛋清液 注入组织样液 取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）2ml 注入试剂A 加入2ml双缩尿试剂A 加入双缩尿试剂B 观察颜色变化 [1]斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸铜溶液 ）分别配制、储存，使用时再临时配制，将4—5滴乙液滴入2 ml 甲液中，配完后立即使用。 [2] 双缩尿试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的NaOH溶液），造成碱性的反应环境，再加B液（ 0.01g/ml 的硫酸铜溶液 ）。 [5]在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验材料，必须提前浸泡3—4个小时，浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成型，染色时间不易过长。 [4]在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。 [3]在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲出试管，造成烫伤。 课堂练习 1、用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程是（ ） A、无色→砖红色（沉淀） B、浅蓝色→砖红色（沉淀） C、浅蓝色→蓝色→砖红色（沉淀） D、浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀） D